中山大学《细胞生物学》相关问题的分析 动物基因敲除研究的现状与展望.pdfVIP

动物基因敲除研究的现状与展望 李湘萍1 ,2 ,徐慰倬1 ,李　宁1 (1. 中国农业大学农业生物技术国家重点实验室 ,北京 100094 ;2. 广西大学工业测试实验中心 ,南宁 530004) 摘 　要 :基因打靶技术是建立在胚胎干细胞和同源重组技术之上 ,可对基因组进行定位修饰的实验方法 ,尤其可以 在转基因动物的遗传性状修饰中起到巨大的作用。本文简述了转基因、体细胞克隆和基因打靶的研究历史 ,以及 这些技术对转基因动物制备的影响和展望。 关键词 :转基因 ;克隆 ;基因打靶 中图分类号 :S813. 3 　　　文献标识码 :A 　　　 文章编号 :0253 - 9772 (2003) 01 - 0081 - 08 Research Progress and Prospect of Animal Gene Targeting L I Xiang2Ping1 ,2 ,XU Wei2Zhuo1 ,L I Ning1 (1 . N ational L aboratory f or A grobiotechnology , Chi na A gricult ural U niversity , Beiji ng 100094 , Chi na ; 2 . Indust ry Test Center , Guangxi U niversity , N anni ng 530004 , Chi na) Abstract :Established upon the embryo stem cell technique and homologous recombination ,gene targeting has been widely used in the genome specific manipulation ,especially applied in the genetic trait modification of transgenic animal. Our paper reviewed the history of transgenic animal ,somatic cloning and gene targeting ,which indicates the influence towards the current status and prospect of the transgenic animal production. Key words :transgene ; cloning ; gene targeting 1 　小鼠基因敲除研究的现状 1. 1 　历史回顾 从 1981 年第一只转基因 (transgenic) 小鼠诞生开始[ 1 ] , 转基因技术的研究对象就很快从小鼠扩大到农业动物上来。 转基因的目的产物也从最早的生长激素演变为各种的药用 蛋白。20 世纪 80 年代早期建立的胚胎干细胞技术 ,为现代 生命科学研究引入了革命性的变化 [ 2 ,3 ] 。胚胎干细胞是从 早期胚胎中分离出来的多潜能细胞 ,经过体外的培养和遗传 修饰 ,仍然具有分化的全能性。在胚胎着床前期引入胚胎干 细胞 ,可以发育成多种组织嵌合体 [ 4 ] 。 基因敲除 (gene knockout)又称基因打靶 (gene targeting)是 通过外源 DNA 与染色体 DNA 之间的同源重组 ,精细地定点 修饰和改造基因 DNA 片段的技术。它是在胚胎干细胞技术 和同源重组技术基础上发展起来的 ,具有位点专一性强、打靶 后目的片段可以与染色体 DNA 共同稳定遗传的特点 ,目前已 成为一种较理想的改造生物遗传物质的实验方法。 基因敲除技术早在 20 世纪 70 年代就在酿酒酵母 ( S . cerevisiae)中得以应用[ 5 ] 。1981 年小鼠胚胎干细胞 (embryo stem ,ES)的分离为在基因打靶提供了更为合适的操作对 象[ 6 ] 。1985 年 ,Smithies首次利用同源重组将一段外源质粒 p △β117 插入到人染色体的β2珠蛋白位点 ,这是第一例在哺 乳动物细胞中进行的基因打靶[ 7 ] 。两年以后 , Smithies 和 Capecchi 等两个研究小组同时报道在小鼠 ES 细胞中进行了 基因敲除[ 8 ] 。此后 ,用小鼠 ES 细胞进行基因敲除的研究蓬 勃发展起来 ,并已成为研究基因结构功能和建立人遗传性疾 病模型的一种常规实验方法。目前已经建立的突变小鼠有 近千种 ,并以每年数百种的速度增加。在人类基因组序列分 析的结构基因组学的研究完成后 ,基因敲除将成为在功能基 因组学研究中最直接和最有效的方法之一 [ 9 ] 。 收稿日期 :2002 - 04 - 09 ;修回日期 :2