中山大学《细胞生物学》相关问题的分析 基因敲除技术现状及应用.pdfVIP

医学分子生物学杂志 , 2007, 4 (1) : 86290　J Med Mol B iol, 2007, 4 (1) : 86290 通讯作者 : 汤华 (电话 : 022223542603, E2mail: htang2002@yahoo1 com) Corresponding author: TANG Hua ( Tel: 86222223542603, E2mail: htang2002@yahoo1com) 基因敲除技术现状及应用 万海英　综述　　汤华　审阅 天津医科大学天津市生命科学中心实验室　天津市 , 300070 【摘要】　功能基因组学的研究进展使基因敲除技术显得尤为重要。基因敲除技术从载体构建到细胞的筛选 到动物模型的建立各方面都得到了发展。其中 Cre2LoxP系统可以有效的控制打靶的发育阶段和组织类型 , 实 现特定基因在特定时间和 (或 ) 空间的功能研究 ; 转座子系统易于操作 , 所需时间短 , 具有高通量的特点 , 可以携带多种抗性标记 , 方便了同时进行多基因功能研究 ; 基因捕获技术提供了获得基因敲除小鼠的高效方 法 , 方便了进行小鼠基因组文库的研究。此外 , 进退策略、双置换法、标记和交换法、重组酶介导的盒子交 换法也从不同方向发展了基因敲除技术。 【关键词】　基因敲除 ; Cre2LoxP系统 ; 转座子 ; 基因捕获 【中图分类号】　R34918 Sta tus Quo and Applica tion of Gene Knockout WAN Haiying, TANG Hua Tianjin M edical U niversity, Tianjin L ife Science Center, Tianjin, 300070, China 【Abstract】　Gene knockout is important for functional genom ics1 Great p rogress has been made in the vector construction of gene knockout, screening of aimed cells and animalmodels and the develop2 ments in these fields help to solve the p roblem s in the study of genom ic functions1 Cre2LoxP system can effectively control the development stage and histology of gene knockout, thereby making it possi2 ble to study gene function in a given time and /or space1 Transposon system is easy to manipulate, quick and can achieve high throughput, carry multip le resistance marker gene, which makes simulta2 neous study of multip le genes possible1 Gene trapp ing p rovides a highly efficient method of obtain knockout m ice and can facilitate the research of m ice genom ic library1 In addition, the techniques such as“hit and run”,“double rep lacement”,“tag and exchange”and“recombinase2mediated cas2 sette exchange”all contribute to the development of gene knockout technology1 【Key words】　gene knockout, Cre2LoxP system, transposon; gene trapp ing 　　基因敲除又称为基因打靶 , 是指从分子水平上 将一个基因去除或替代 , 然后从整体观察实验动物 , 推测相应基因功能的实验方法。基因敲除技术是功 能基因组学研究的重要研究工具。 基因敲除技术是在 20世纪 80年代后半期应用 DNA同源重组原理发展起来的。胚胎干细胞 ( em2 bryonic stem cell , ES细胞 ) 分离和体外培养的成功 及哺乳动物细胞中同源重组的存在奠