实验七 病料的采集、包装和运送（副本）.docVIP

实验七 病料的采集、包装和运送 一、实验前的几点说明 提前十分钟进入实验室，抄写板述。上课，点名入座。 二、板述内容： 1、目的要求 1.1、认识病料的采集、包装和运送的意义。 1.2、掌握病料采集、包装和运送的一般原理、操作实验内容。 2、实验内容 1.1、家兔心脏采血20ml，置无菌平皿供分离血清用。 1.2、用注射器先及2ml肝素、家兔心脏采血10ml置无菌试管供分离病毒用。 1.3、解剖家兔，采集心肝、肝、脾、肺、肾及淋巴结等盛入无菌平皿中供细菌学检查。 1.4、将上述所采脏器置50﹪磷酸甘油缓冲液上保存，供病毒学检查。 1.5、将上述平皿内所析出的血清移入另一试管加入适量抗生素供血清学检验用。 1.6、将溶器表面消毒，注明病料来源、种类、保存方法及采集时间。用蜡封口，将所有病料放入盛有冰块的保温箱中，带送检单专人送检。 三、实验内容 对传染病患畜（禽）进行微生物学诊断，并获得准确结果，是诊断传染病最确切的依据之一。要分离病原微生物，必须准确采集含菌（病毒）最多的病料。而要准确采集病料，又必须充分了解各种病原微生物在患畜（禽）体内及其分泌物和排泄物中的分布情况。不同是病原微生物在患畜（禽）体内的分布情况是不同的；即使是同一种病原微生物，在病程的不同时期和不同病型中分布也不相同。因此在采集病料之前，必须根据该传染病的流行病学特点、临床表现和病理解剖学检验的结果，对被检动物可能患有什么样的疫病作出初步的诊断。然后有针对性地采集最合适的病料进行微生物检验，这样才容易得到准确结果。家畜传染病给畜牧业生产带来的损失是众所周知的，因此，迫切要求对传染病进行快速而准确的诊断。这对早期扑灭传染病的流行是非常必要的。 采集病料时应尽可能避免杂菌的污染，要求尽量做到无菌操作，所用的器械、容器等均要求无菌。生前采集的病料，如血液、脓汁、分泌物、粪尿等应尽早送检，不宜久置。患畜（禽）死后，应立即剖检采取病料，以防组织腐败、不利于病原体的分离。采得的病变组织亦应立即送检。因故缓期送检时，则需冻结保存；但保存的时间也不应太久。小动物（如家禽、家兔、羔羊、仔猪等）可将其整个尸体装入塑料袋内送检。 家禽传染病的微生物诊断方法较多（如显微镜检查、电子显微术、分离培养、组织培养术、荧光抗体法及一般血清学反应等），各个方法对病料的要求又各不相同，因此要求病料在采集时间、初步处理、保存条件、运送方法等方面都要符合实验室相应检查方法的要求。 进行人畜共患传染病病尸的剖检时，须作好个人防护工作和环境的消毒工作，以免发生自身感染和散播病原。凡认为动物死于炭疽或可疑炭疽时，严谨剖检。剖检时要对病尸及其各个组织器官的病理变化进行详细的记录。 （一）各种病料的采集与保存 1.涂片或触片 可用病灶组织、脓汁、血液等制成涂片或触片，待自然干燥后送检。血液涂片可制两种，一种为薄血片，供显微镜检查用；另一种为厚血片，供细菌分离或接种实验动物用。所有涂片或触片的一端贴上标签，注明来源、是否在、固定等。供病毒子或包涵体检查的玻片，要求十分清洁，须事先经清洁液浸泡，水洗后置于50%酒精中备用。检查包涵体时，还可采集早期的病灶组织，并浸泡在固定液中保存，以供制备病理切片。 固定液的配方是: 40%甲醛 50ml 冰醋酸 120ml 96%酒精 1100ml 苦味酸 8ml 蒸馏水 100ml 2.为了细菌学的检查，可采集组织脏器，如肝、脾、肾、心肌、淋巴结、胸组织等，其大小以5cm3为宜。将采集的病料盛入无菌容器中送检。液态病料，如痰、黏液、脓汁、腹水、脑脊液、关节液及胆汁等，可用无菌注射器吸取后装入无菌试管中或用无菌棉球、无菌棉花拭子蘸取后，放入无菌试管中送检。凡装有病料的容器均要求直立，瓶口或试管口棉塞要用融化的石蜡密封。 3.供病毒学检验的病料的采集和保存要求比较严格。应使采集的病料尽可能含病毒量多、纯净和不致灭活。因此，最好从发病的早期活体或急宰的尸体上取样。 （1）血液 可于病的早期采集，最好同时采集两份血液，其中一份加肝素（每毫升血液加入一毫克即100单位）抗血液凝固，或以玻璃脱纤维蛋白，最好不用枸橼酸钠作抗凝血剂，因为枸橼酸钠不仅有微弱的灭活病毒的作用，而且在接种动物时易引起非特异性反应，从而影响病毒的分离效果。另一份血液在自然凝固后分离保存其血液，供血清学检验之用。 （2）病毒学检验的组织脏器常用50%的磷酸盐缓冲液甘油保存。伴发水疱、脓疱或有分泌物的病毒性疾病，可采用病初的疱液、脓汁或分泌物，也可采集病灶的组织。最好在水疱、脓疱等未破溃前用无菌毛细吸管穿透疱皮直接吸取疱液、脓汁或分泌物，然后迅速用火焰封口。也可用无菌注射器吸取疱液、脓汁或分泌物后，立即混入等量的无菌缓冲液（如磷酸缓冲肉汤、10%灭