3环境污染的微生物检测精编.ppt

The Benefits of Microtox The Microtox system has many benefits over other toxicity testing systems. The low cost enables it to be used as a regular monitoring and screening test. A full Microtox assay is about a tenth of the cost of other toxicity tests. It is usually desirable to have toxicity results as soon as possible. Microtox assays can be completed within an hour and a report available within 24 hours, making them a very rapid form of testing. 二、硝化作用抑制试验（nitrification inhibition test） 1989年国际标准化组织把该方法作为检测化合物或废水毒性的标准化方法（ISO9509）之一 1.试验原理 NH3 NO2- NO3- 亚硝化细菌 硝化细菌 二、测试方法 硝化作用抑制试验可单独选择亚硝化单胞菌或硝化杆菌，也可采用活性污泥中的混合菌株。 菌种活化与增殖 样品稀释与设置 培养与取样 比较与计算 三、真核微生物检测方法 （一）藻类生长抑制试验（alage growth inhibition test） 1.试验原理 藻类对水体污染的反应十分敏感。 藻类的生长量和水体污染的关系很大。 水质监测和毒性检测常用的有硅藻、栅藻、小球藻等 2.试验方法 藻类生长量的测量 藻体生长量 放氧量 摄取14C量 细胞DNA和ATP的测定 藻体生长量的测量 细胞计数 藻体干重 藻液浑浊度 叶绿素a含量 繁殖纯藻种 试验配置与藻类接种 同等适宜条件下培养 定时取样检测并绘制生长曲线 计算与分析 3.毒性测定程序 第三节 污染物致突变的微生物学检测方法 污染物对人体的潜在危害，引起人们的普遍关注。 世界上已发展了百余种短期快速测试法，检测污染物的遗传毒性效应。 目前一般认为人类癌症的发生与环境污染物的致 突变性有一定的关系。 诱变剂作用的共性原则： 超过95%的致癌物质对微生物有诱变作用； 化学药剂对细菌的诱变率与其对动物的致癌性成正比。 所有这些检测试验都基于两个原则 90%以上的非致癌物质对微生物没有诱变作用。 人和细菌在DNA的结构及特性方面是一致的，能使微生物发生突变的诱变剂必然也会作用于人的DNA，使其发生突变，最后造成癌变或其他不良的后果。 生命的“生物化学统一性”法则： 美国加利福尼亚大学Bruce Ames教授等于1975年正式建立的沙门氏菌回复突变试验（亦称Ames试验）已被世界各国广为采用，是检测环境诱变剂的的首选试验。 一、 Ames试验 Ames试验是检测DNA碱基序列是否发生改变即基因突变的一种方法。 1.试验原理 鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium）的组氨酸营养缺陷型（his-）菌株，在含微量组氨酸的培养基中，除极少数自发回复突变的细胞外，一般只能分裂几次，形成在显微镜下才能见到的微菌落。受诱变剂作用后，大量细胞发生回复突变，自行合成组氨酸，发育成肉眼可见的菌落。 野生型与组氨酸营养缺陷型关系如下： 野生型his+ 营养缺陷型his- 正向突变 回复突变 回复突变(reverse mutation或back mutation)： 突变体失去的野生型性状，可以通过第二次突变得到恢复，这种第二次突变称为回复突变。 实验菌株 目前推荐使用的一套菌株是组氨酸营养缺陷型菌株TA97、TA98、TA100和TA102。鉴定前先进行增菌培养。 为鉴定结果可靠，需同时培养野生型TV菌株，作为测试菌基因型之对照。 由于生物体内、体外可能存在的差异，可在体外加入哺乳动物（如大鼠）微粒体酶系统，使待测物活化，使Ames试验的准确率达80-90%。 哺乳动物微粒体酶 S9混合液：雄性大鼠肝脏匀浆物上清液+辅酶Ⅱ +G-6-P Most environmental genotoxins are found in an inactive state (progenotoxin) and must be metabolically activated to become DNA-damaging substances. The incorporation of a mammalian (rodent) hepatic metabol