第五章-同济大学医学院精编.ppt

* * * 3、反式作用因子 反式作用因子 核内蛋白质因子  有与DNA结合的结构域 识别顺式作用元件 数量少  正或负调控 主要特点 三个结构功能域： DNA识别结合域 转录活性域 与其他蛋白的结合域 反式作用因子 RNA聚合酶：RNA pol I/II/III。 转录因子：RNA聚合酶的辅助因子，结合启动子核心序列为基础转录所必需。 转录激活因子与转录阻遏因子：与UAS或增强子结合，调节转录活性。 共激活因子与共阻遏因子：不结合DNA，与转录因子或转录激活/阻遏因子结合。 （1) RNA聚合酶 RNA聚合酶 II 特异性转录 II 型核基因启动子(mRNA启动子)。 由12个亚基组成。 200kD亚基与原核生物β亚基同源。 真核生物RNA聚合酶需要多种调节蛋白的协同才能进行转录。 基础水平转录：30种多肽 调节性转录：更多的多肽因子。 (2) 转录因子 Transcription factor II（TFII）是与 RNA 聚合酶 II 协同作用的一类转录因子。 预起始复合体 RNA聚合酶与多种转录因子共同形成 preinitiation comples (PIC)。 TFII D 具有 TATA结合蛋白(TBP)亚基与多种转录共激活因子(TAFs)亚基，是识别TATA并起始转录的关键。 PIC相当于原核生物 RNA 聚合酶的全酶。 反式因子的结构特征 DNA结合功能域：识别并结合特定DNA序列。 锌指结构 螺旋－转角－螺旋 亮氨酸拉链 螺旋－环－螺旋 转录激活功能域：蛋白－蛋白相互作用。 　（酸性α螺旋、富含Gln域、富含Pro域） 锌指基序 Zinc finger motif：25－30 氨基酸的保守结构，内含 4 个 Cys，或 2 个 Cys，2 个 His。 DNA结合区往往具有多个锌指。 可分为： Cys2/Cys2 Cys2/His2 Zn2+ Cys Cys His His 锌指基序的空间结构 锌指与DNA的结合 锌指结构是反式作用因子DNA结合域最广泛的基序。 TF III A：9 个His2/Cys2 SP1：3 个His2/Cys2 糖皮质激素受体： 2 个 Cys2/Cys2 雌激素受体： 2 个 Cys2/Cys2 螺旋－转角－螺旋基序 Helix-turn-helix：由 3 个α螺旋与 1 个转角组成，含60个AA左右，与DNA大沟结合，主要参与正常发育或细胞分化相关基因的表达。 最先在原核生物发现，如：CAP、AraC等。 在果蝇中发现的类似结构称同源盒(homeobox)。 亮氨酸拉链基序 leucine zipper：约30个AA组成，N端富含碱性AA，形成DNA结合面，每隔6个AA残基出现1个Leu，残基，为Leu拉链区。 由两个具有Leu拉链区的反式作用因子以疏水力作用形成Leu拉链。 往往为二聚体，通过两个富含亮氨酸的α螺旋结合。 哺乳类中广泛存在： CREB，C/EBP、AP1、Jun/Fos 螺旋－环－螺旋基序 Heilx-loop-helix：与亮氨酸拉链相似，改变是螺旋被环隔断。 含HLH转录因子： 原癌基因产物 Myc/Max。 Igκ链基因增强子(κE)结合蛋白 E12/E47。 转录活化结构域的特征 酸性α螺旋结构域 富含谷氨酰胺的结构域 富含脯氨酸的结构域 3、反式因子的活性调节 ◆转录因子的磷酸化－去磷酸化 CREB 的磷酸化： cAMP 激活 PKA 使 CREB 磷酸化，形成有活性的二聚体(亮氨酸拉链)。 Igκ基因κB 增强子结合转录因子 NF-κB： 在细胞质内以无活性去磷酸化状态，在细胞核中转变为有活性的磷酸化状态。 转录因子的表达式调节： 需要时合成，合成出来就有活性，并通过蛋白水解迅速降解，不能积累 配体结合：激素与受体结合后激活转录 反式作用因子间的相互作用 成环学说：相隔较远的两段顺式元件分别结合其反式因子，通过反式因子间的相互作用而成环，产生调节作用。 （反式因子结合增强子后，利用DNA的柔曲性，弯曲成环，使增强子与RNA聚合酶结合位点靠近，直接接触而发挥作用）。 反式因子间的相互作用是转录调节的基础。 三、转录后水平调控 帽结构：(1)防止mRNA降解、延长mRNA寿命 　　　　 (2)与核糖体小亚基结合 　　　　 (3)被翻译起始因子识别作用。 Poly(A)尾 (1)保护作用 (2)转运作用。 内含子剪接：选择性剪接。 1、 帽结构m7G(5,)ppp (5,)N1mpN2m…， 2、 P