食用菌母种的分离精编.ppt

食用菌母种的分离制备 一、母种培养基的制备及接种培养 （一）母种培养基制作： 1.用具、设备： 灭菌锅、锅、试管、电炉、漏斗、超净工作台、培养箱等。 2.PDA培养基配方： 去皮马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂粉8克，水1000亳升，pH值自然。 3.工艺流程： 称量→煮制→分装→灭菌 → 排斜面→无菌检验 培养基的分装及排斜面示意图 1．组织分离法制母种（无性繁殖） 将子实体、菌核、菌索等一小块组织接种于斜面培养基上，使其萌发为纯菌丝的方法，称为组织分离。该法具有简便、易成功、能保持原菌种性状等优点，但重复多，易退化，应与孢子分离交替进行。组织分离法适用于绝大多数食用菌 （二）、母种的接种与培养 种菇选择： 在出菇场要选择肉厚肥大、鲜嫩，出菇早、菇形整齐、菌柄短且无病害的做种。 表面消毒： 将种菇表面用清水冲洗干净，放在接种箱（或无菌室内）进行表面消毒。用镊子将种菇放在培养皿内，用另一反镊子夹75%酒精棉球（或0.1%升汞棉球）对种菇进行表面消毒，然后移入另一培养皿内再用无菌水反复洗涤三次，洗净残留的消毒剂。 实验方法 菌柄与菌盖交界处取组织块 用解剖刀或鲜剖剪蘸酒精进行火焰消毒，冷却后把自己消毒的种菇纵切开，然后用菌盖笔菌柄交界处，切取长宽的0.3~0.5厘米的菌肉组织块，用接种针移到斜面培养基上，置24℃恒温箱中培养。 检查筛选 每天检查试管斜面菌落生长情况，如从分离的菌肉组织块上长出正常的白色菌丝，即分离成功，及时将生长出来的菌丝转移新的试管斜面。若在组织块附近或其他地方出现其他颜色杂菌生长应予以淘汰。 纯化培养 将菌丝块移入PDA平板培养 若纯：四周辐射状生长，外缘整齐一致 否则：边缘参差不齐，色素分布不均匀 将较一致的菌丝的前端，切割→新培养皿 菌肉组织分离示意图 菌核组织分离示意图 2．孢子分离法（有性繁殖） 孢子分离有单孢分离和多孢分离两种方法。单孢分离由于技术难度大，主要用于杂交育种的研究，生产上较少采用，一般采用多孢分离法。 孢子收集器示意图 　3、母种转管接种与培养。 母种的接种必须在严格的无菌条件下进行。否则将会造成严重污染，给生产造成造成巨大损失。然后将所有试管及接种器具放入接种箱里进行消毒灭菌，力求灭菌彻底。在点燃酒精灯火焰上进行操作，将菌种试管和接种用斜面培养基放在火焰旁。拨去棉塞，把消毒灭菌的接种针伸入菌种试管内，挑小块菌种放入斜面培养基中（见下图） 斜面试管转管接种 二、原种培养基的制备及接种培养 （一）、原种常用培养基制作： 1.用具、设备： 高压蒸汽灭菌锅或常压蒸汽灭菌锅；铝锅、电炉；拌料机；装袋机；无菌室、接种箱或超净工作台；培养箱或培养室等。 2.培养基配方： 　　① 木屑培养基：木屑78%，麸皮或米糠20%，石膏1%，糖1%，水适量。适用于培养平菇、木耳、香菇、猴头。 　　② 棉子壳培养基：棉子壳99.5%，石膏0.3%，水适量。适用于培养平菇、猴头、金针菇、鸡腿菇。 3.培养料的配制 ⑴ 木屑、棉籽壳培养料的拌料配制 木屑、棉籽壳培养料按配方称量后，堆制混和，加水拌料，配方中的糖也可先溶于水中再拌入。拌料时要控制料的含水量在60﹪左右 。 ⑵ 谷粒培养料的配制 谷粒因其营养较丰富，制作的菌种具有菌丝萌发早、吃料快、抗衰老能力强、产量高等优点，在生产中应用较多。一般是采用浸泡法或煮熟法，也可用石灰水浸泡。 4.装袋或装瓶 将培养料拌匀装入菌种瓶（或袋）内、装料松紧适宜，上下一致，装料高度以齐瓶（袋）肩为宜。然后用锥形木棒在瓶的中央向下插一个小洞，塞上棉塞。装好的料瓶（袋）要当天灭菌，以免培养料发霉变质。 5.培养基的灭菌 通常采用高压蒸气灭菌法和常压蒸气灭菌法以达到灭菌的目的。高压灭菌2小时或常压灭菌于100℃维持8-10小时，灭菌后培养基最好放在适温下，空白培养5-7天，以检查培养基灭菌的效果。如在此期间没有出现任何杂菌，说明灭菌效果良好。待其冷却30℃以下可接种。 三、栽培种培养基的制备及接种培养 栽培种是直接用于生产的菌种。生产种的优劣，对产量有着直接的影响。栽培种的培养基和接种方法，基本上和原种相同。栽培种是用培养好的原种进行扩大接种的。 栽培种制作示意图 四、菌种质量 　　优质菌种是食用菌栽培成功的重要保证。因此，在食用菌栽培中，既要了解各类菌种的贮藏保管方法，又要能正确选用菌种，识别菌种的真假与优劣。 1、母种的保藏 母种量少，一般保藏于冰箱里。 2、原种与栽培种的保藏 培养好的原种