神经形态学方法贾栋讲述.ppt

轴浆运输：神经终末释放的神经肽及合成经典递质的酶需在胞体合成，神经末梢所含的影响细胞代谢的物质（如神经营养因子）也需逆向转移至胞体。 顺向运输：从胞体向轴突及其终末的运输 * * HRP：辣根过氧化物酶，从辣根中提取，是由一个分子的五色酶蛋白与一个分子的棕色铁朴啉辅基结合形成的一种结合酶，它可以用组织化学方法显示HRP运输结果。 WGA：麦芽凝集素，HRP与WGA共价偶联后形成WGA-HRP，可大大提高追踪的灵敏度。和霍乱毒素结合后，除了灵敏度高和用量少外，还延长了HRP的讲解时间，并能清晰地显示包括细微分支在内的整个神经元全貌。 * 用紫外线分光光度计检测HRP时，在275nm和403nm处各有一个吸收峰，故RZ也称吸收比，作为追踪剂的HRP，RZ值至少要在2.5以上，3以上更佳 * Sacral cord骶髓 sciatic nerve坐骨神经 HRP标记的图像 * 常用的荧光素燃料 * 激发光使稳态电子变为激发态电子，进而释放能量，形成荧光 * 每一种荧光都有自己的激发波长和发射波长，不同的发射波长决定了荧光素发出的颜色各异。CY5的发射波长集中在600-800之间。 荧光素用于神经通路追踪，除了具有可靠性和灵敏性之外，其更突出的特点是利用其不同颜色可同时追踪和显示多重神经联系，也可用于发育、移植和细胞内标记。 * * PHA：菜豆凝集素，它是由四个亚单位组成的糖蛋白。4个亚单位均为L，则为PHA-L。PHA-L能通过细胞膜上特异性细胞受体的介导而被细胞胞饮入神经元内，随轴浆流向末梢运输，故PHA-L只能用于顺行追踪。 将CTb注入某核团后，可以观察该核团的传入和传出联系 * 直接法：简单，需时短，特异性强、灵敏度低、需要标记每一种抗体，需要抗体量大，已被间接法替代，几乎现在已无人使用。 间接法：较前者灵敏，标记强度得到放大，只需标记一种IgG抗体即可鉴别多种抗原 * PAP法（过氧化物酶-抗过氧化物法）属于间接法，每个PAP复合物含2个抗HRP的IgG分子及3个HRP分子。PAP法需用3级抗体。较间接法更加灵敏。 ABC法（卵白素-生物素结合的HRP复合物）属于间接法，操作时间短，灵敏度高。 * 原位杂交是用标记的单核酸探针与组织切片反应的方法。在神经形态学研究中，主要用于显示神经元内的mRNA。其灵敏度已达到可以显示细胞内仅几个拷贝的mRNA的程度。 * 荧光原位杂交 * 前包埋 后包埋 SDS-FRL：冰冻蚀刻免疫组化纳米金标记电镜技术 * Allele 等位基因 * 第三节 免疫学与组织化学原理结合的结晶——化学神经解剖学 2010, December; 13(12): 1526-1533. 神经组织只有神经元和胶质细胞两种成分。 神经元的特点是胞质内有Nissl小体和纤维结构，Nissl小体是神经细胞特有的容易被碱性燃料染色的小块，出现于胞体及树突基部，轴突和轴丘内无此小体；Golgi法：用硝酸银着染整个神经元，它可以看出完整的神经元轮廓及其凸起的走形方向；Weigert可以使髓鞘染色。 * Mrrchi法可以染变性的髓鞘，对束路学研究贡献大；Nauta法可以显示变性纤维靠近终末部分的变性像。 * 脑细胞，主要包括神经元和神经胶质细胞。脑细胞不可再生，一旦发育完成后，再也不会增殖。人的一生就只有出生时那个数目的脑细胞可供利用，大约140亿个。 脑细胞处在一种连续不断地死亡且永不复生增殖的过程，死一个就少一个，直至消亡殆尽。人到20岁之后,大脑开始衰老，脑细胞就开始以每天10万个速度递减，人们一直认为大脑只开发了10%左右，这种谬论统治了人类将近100年，最近的核磁共振显示，人类大脑的每个地方都是高效利用的，大脑开发率高达100%，并不存在所谓的沉睡，闲置细胞。 一般人认为，脑细胞密密麻麻地排列着，如电路一般，微弱的电流流过这些脑细胞并传达着大脑的命令。 事实上并非如此，细胞与细胞之间并不直接连结，中间均存在着小小的缝隙。 充当导线作用的是弥散在细胞与细胞之间的神经递质，它们充当着脑内信息的传递者。这种神经递质分泌于突触前体，大脑的各个地方，大脑通过电冲动经神经传播到神经突触，神经突触释放神经递质向全身传递指令，于是身体也分泌同样的神经递质，通过这种神经递质接受信息的细胞根据命令采取行动。 也有人把脑细胞比作一个微小的生物电池，随时准备放电。荷电的元素称为离子，它们在脑细胞内外的数量不等，从而在细胞膜两侧形成微小的电位差。人类脑细胞内部记录到的电位要比外部低70毫伏（以-70mV表示），这种电位称为静息电位，这种细胞膜“外正内负”状态称为极化。 从另一个脑细胞传来的信息改变了静息电位，使其负值改变，到达一个称为阈的水平，引起放电。人类脑细胞的阈约为 -55mV，当达到此值时，脑细胞就产生一种沿轴突传播的电变化，