大鼠心脏移植模型制作.docVIP

大鼠心脏移植模型制作 大鼠心脏移植模型是研究移植排斥反应、器官保存和药物筛选的常用动物模型。由于此模型操作简单、能直接观察到移植物的状况，通过观测移植心是否搏动和/或心电图可以鉴别移植物的存活情况，耐受和排斥、成功和失败的标准明确。因而应用十分广泛。自20世纪60年代Abboll等创立心脏移植模型依赖，经过多次修改，目前受鼠操作、存活率均较以前有很大的提高。一、手术器械：显微外科手术器械包，手术显微镜1台，自制S拉钩（用橡皮筋一端带弯成S形大头针）4个，眼科剪1把，其它外科器械若干及纱布、棉球、棉片和橡皮条等。二、??供、受者大鼠的选择根据不同的研究目的选择不同的动物品系，在同种移植模型中，一般采用两种纯系健康大鼠，如Lewis大鼠，Brown Norway 大鼠（BN），DA大鼠等，国内应用Wistar，SD大鼠也比较多。如果是异种移植可以选用豚鼠－大鼠，仓鼠－大鼠，小鼠－大鼠等不同品系的动物。三、麻醉麻醉采用戊巴比妥钠50mg/kg体重腹腔麻醉的方法，可以以采用5%水合氯醛3ml/kg体重，麻醉过浅时加乙醚吸入辅助、四、??供心切取手术大鼠麻醉后仰卧位固定，用酒精消毒胸腹部，正中切口1次剪开胸腹部皮肤，暴露胸部，沿腹白线开腹，暴露腹主动脉和下腔静脉，并从下腔静脉缓慢注入2ml 含肝素的无菌生理盐水（25IU/L）全身肝素化，然后横断腹主动脉和下腔静脉放血，迅速打开胸腔，0℃～4℃预冷的平衡液不断淋浇心脏表面，并向胸腔加入少量冰屑，分别在靠近右心房处结扎并切断下腔静脉和右上腔静脉，结扎右上腔动脉时将右心耳一起结扎。游离升主动脉、肺动脉和无名动脉，实施腹部心脏移植模型则在无名动脉分叉处剪断，如果是颈部心脏移植模型，于主动脉分出无名动脉的远端结扎切断主动脉，于靠近主动脉约1mm处切断无名动脉，再在左右肺动脉分叉处剪断肺动脉，提起心脏，1次结扎左上腔、左肺和右肺静脉以及周围组织，并在远心端剪断，取下供心，放入0℃～4℃平衡液内保存。五、??受者手术（一）??大鼠心脏腹部异位移植术：从腹正中线开腹，自制S型拉钩将腹壁牵向两侧，充分暴露手术野，进入腹腔后将肠袢推向右侧，以温盐水纱布盖好。打开后腹膜，在肾静脉水平以下将腹主动脉和下腔静脉在血管稍外和两侧软组织游离。在肾血管和髂血管分叉以上分离结扎两侧的腰静脉，并将下腔静脉背侧2～3条分支结扎，用2只哈巴狗夹分别在肾血管下方和髂血管分叉上方约5mm处阻断腹主动脉和下腔静脉，用尖刀在腹主动脉前壁挑开一小口，然后用显微弹簧剪延长切口大约与供心的升主动脉口径相当，用含肝素（25IU/L）的盐水冲洗吻合口内血块，于下腔静脉前壁同样挑开一个小口，由于下腔静脉壁薄，预防将其后壁同时挑开，然后同样的用显微弹簧剪将其切口扩大，与供心肺动脉口径相当即可，同样用肝素盐水冲洗血管腔，将血管腔内的凝血块冲出。下腔静脉开口一般在腹主动脉开口的下方，位置稍有一定的偏移，避免在一个平面上。从0℃～4℃的保存液中取出心脏，以冰盐水棉片保护供心，棉片周围覆以冰屑以防在受者腹腔移植心复温。用8－0的无创缝合线先将供心的主动脉和受者的肺动脉切口对角缝合2针，然后先内侧壁，后外侧壁，从右向左进行连续缝合，针距和边距均为0.3～0.5mm。同样，用8－0无创缝合线将供心主肺动脉与下腔静脉切口对角缝合两针，然后在下腔静脉腔内从右向左连续缝合内侧壁，继而从左向右在下腔静脉强外连续缝合外侧壁，针距和边距均为0.3～0.5mm。缝合静脉吻合口时，注意勿过度用力拉紧缝线，以免造成流出道狭窄。缝合最后2针前，用钝性弯针头向吻合口腔内注入25IU/L肝素盐水，排除残留空气，以防气栓形成。吻合完毕，先松开远心端哈巴狗，然后再缓慢松开近心端哈巴狗，同时观察动脉吻合口有无喷射状出血，如果有喷射状出血可再次阻断血管后给予修补，如有渗血，用棉球压迫止血，循环开放后心脏颜色立即变为鲜红，2～3分钟后心脏由室颤变为有力收缩。检查吻合口有无出血，如无出血将肠管推回腹腔，缝合关闭腹腔。???图1 供心主动脉与受者腹主动脉端侧吻合 图2 供心肺动脉与受者下腔静脉端侧吻合（二）大鼠心脏颈部异位移植术：受者腹侧向上，头对术者，其上门齿用一橡皮筋拉伸固定，剃毛后自下颏中点至右锁骨中点作一皮肤切口，自锁骨处游离右外静脉直至其分叉处，沿途各细小属支均结扎切断或用笔式电灼器离断，切断右胸锁乳突肌以暴露右颈总动脉，于气管食管沟右侧可以找到右颈总动脉，打开颈总动脉鞘，游离右颈总动脉后，于其近端上一无创性显微血管夹，远端结扎切断，取出供心，在吻合过程中要不断以0℃～4℃冰平衡液淋浇，避免复温。在10倍镜下用10－0的无损伤显微缝线行供心无名动脉与受者颈总动脉单线连续或间断缝合，先行前壁腔外连续缝合，缝至血管后壁时可将心脏向右扭转以获良好暴露，然