德国鸢尾的组织培养.docxVIP

植物组织培养实验设计方案实验组别:12级生物技术班B组组员:董发明雷艳萍张金菊陈冬梅薛勰德国鸢尾的组织培养实验目的与实验要求学习植物组织培养的配制方法与保存方法。掌握无菌操作的植物组织培养方法。通过诱导德国鸢尾茎尖形成不定芽，进而诱导生成不定根，培养出新植株，学习植物组织培养技术。了解植物细胞通过分裂、增殖、分化、发育，最终长成完整再生植株的过程，加深对植物细胞全能性的理解。认识植物组织培养技术在生产实践中起的作用，尤其在保存珍贵物种和生产研究方面的应用。实验原理德国鸢尾（拉丁名Iris germanica?L.目:百合目科:鸢尾科属:鸢尾属种:德国鸢尾）。德国鸢尾品种系列可用作切花和盆栽, 该品系既可观花又可观叶,在华东地区四季常绿 ,是难得的庭园 绿化材料。在我国, 目前优良的德国鸢尾品种数量很少 , 它在庭园绿化上的应用几乎是 空白 ,因此 ,通过组织培养快速繁殖是目前尽 快满足应用需求的唯一有效途径。本实验的结果可为德国鸢尾种苗的工厂化生产提供一 定的依据。实验器材冰箱，分析天平，烧杯（50mL， 100mL， 500mL， 1000mL），量筒(1000mL，100mL，25mL)，容量瓶(1000mL，500mL，100mL)，磨口试剂瓶(500mL，1000mL)，药勺、称量纸、精密 pH 试纸，滴管、玻璃棒、电炉，微波炉、移液管（10mL，5mL，2mL，1mL，0.5mL），吸耳球，滴瓶，锥形瓶、纱布，耐热橡皮筋，线绳，高压灭菌锅，标签纸，记号笔、解剖工具、托盘、棉花、超净工作台四、实验药品NH4NO3, KNO3, CaCl2?2H2O,MgSO4?7H2O, KH2PO4, KI, H2BO3，MnSO4?4H2O, ZnSO4?7H2O, Na2?MoO4?2H2O, CuSO4?5H2O, CoCl2?6H2O, Na2?EDTA?2H2O，FeSO4?7H2O,维生素 B6,肌醇, 蒸馏水, 琼脂,蔗糖,奈乙酸（NAA），升汞,苄基腺嘌呤（BA）,吲哚丁酸（IBA）,NaOH溶液五、 实验步骤1、母液的配制表 1 母液配制表成分 数量(mg/L) 成分 数量(mg/L)母液Ⅰ 母液ⅡNH4NO3 33000 MnSO4 ?4H2O 22300KNO3 38000 ZnSO4?7H2O 8600KH2PO4 3400 H2BO3 6200MgSO4?7H2O 7400 KI 830CaCL2 ? 2H2O 8800Na·MoO4?2H2O 250CuSO4?5H2O 25CoCl2?6H2O 25母液Ⅳ肌醇 5000烟酸 25维生素B1 5甘氨酸 100维生素B6 25按照上表1配成 100倍母液 8 种，各配成 1L,种母液配完后，分别用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。配时要注意以下几点： a.各化合物必须充分溶解后才能混合。b.混合时注意先后顺序，特别要将钙离子与硫酸根离子，磷酸根离子错开，以免产生硫酸钙、磷酸钙等不溶性化合物沉淀。c.混合时要慢，边搅拌边混合。MS培养基中还需要加入萘乙酸（NAA）、苄氨基嘌呤（BA）等植物生长调节物质，并且分别配成母液（1 mg/mL）。其配制方法是：分别称取这 2 种物质各 100mg， NAA 用少量乙醇溶解，BA 用少量的 NaOH 溶液，溶解过程需要水浴加热，最后分别定容至 100 mL，即得 1mg/mL 的母液。2、初代培养选择露地栽培生长旺盛的德国鸢尾秋季萌发的幼龄株茎尖为材料, 用自来水冲洗净泥土 ,用手术刀去须根和叶,注意保留距茎尖约 1 cm 的材料。先用 10 %的洗衣粉水浸泡 并搅拌消毒 10 min , 再用自来水冲洗干净 ,置超净台上 ,在接种前用 75 %的酒精浸泡 5 min ,用无菌水冲洗 2 次, 再用 0.1 %的氯化汞溶液消毒10 min ,最后用无菌水浸泡 10 ～ 15 min ,在浸泡时间内需经常搅动并换水 3 ～ 4 次。将材料取出后放置于培养皿的无菌纱布上,吸去多余的水分, 然后将近茎尖约 2 mm 区域的组织切成约2 mm ×2 mm ×2 m m大小的外植体块,接种在准备好的培养基上。以MS为基本培养基, 琼脂 0.61 %, pH5.6 ;培养温度 22 ℃,光照12 h 。分化和增殖培养基为：BA 0.5mg/L + NAA 0.2 mg/L，观察和记录增殖情况。3、生根培养将初代培养得到的不定芽接种到生根培养基上（MS +BA