冬虫夏草菌无性阶段的分离和鉴定综述.docVIP

真菌学报8(1):35-40,1989Acta Mycologica Sinica 冬虫夏草菌无性阶段的分离和鉴定刘锡[王+进] 郭兰英(中国科学院微生物研究所,北京)俞永信 曾纬浙江省中药研究所,杭州(四川省中药研究所,重庆) 摘 要: 分离工作在四川康定及北京进行。方法是将康定收集的14批新鲜冬虫夏草，经整体灭菌后,分别割取子座、柄和虫体三部，然后将各部切割成绿豆 大小样的接种体，置于含1% 胨的PDA 上，在20温箱中让其生长；也少量地进行了子囊孢子分离，结果获得90%以上是同一种分生孢子阶段真菌的培养物。而且对该培养物的鉴定表明,是被毛孢属(Hirsutella)一新种__中国被毛孢(Hirsutella sinensis sp.nov.)。并根据这些多批次且大数量接种体(1000个以上)、多途径且重复持续分离,连同子囊孢子分离以及1988年康定点上再次分离的相互验证,皆得到同一种真菌-----中国被毛孢这一事实,我们初步结论: 中国被毛孢是冬虫夏草菌[Cordyceps sinensis (Berk.)Sacc.]的无性阶段。关 键 词: 冬虫夏草菌；中国被毛孢　　冬虫夏草（Dong Chong Xia Cao）系一种虫生真菌、Cordyceps sinensis（Berk.）Sacc.寄生于鳞翅目蝙蝠蛾（Hepialus spp.）的幼虫所成，是一种药用和食用的珍品。在我国古代已对其价值有较广泛而深刻的认识并较早地由我国传入世界各地，特别是东南亚地区。近年来随着国内外的深入研究，进一步认识到冬虫夏草于人体的滋补和医疗方面的重要性。从而促使现阶段需求量激增，而自然资源又深感不足，所以一些研究机构在积极地进行人工栽培技术的研究，但由于菌种的分离方法不当和其无性阶段的报导有所混淆，影响了人工栽培工作的进展。为此，我们于1987年赴四川康定产地进行了冬虫夏草菌的分离和培养。现报道此菌分离物，即冬虫夏草菌无性阶段的特征和鉴定的结果。 菌种的分离培养 （一）供试采集物　　除在康定市场购买2批外，其余16批采集物系先后赴各产地点上收集的新鲜、质佳、完整的冬虫夏草。此外，还在点上收集了正在掷射的子囊孢子于培养基上，并连同一批新鲜冬虫夏草经过处理带回北京保存和分离。（二）组织分离　　将收集来的18批采集物中的14批在康定陆续进行组织分离。方法是每批采集物大多选5条、仅2批选2条的新鲜完整的冬虫夏草进行表面灭菌处理之后，将每一条分割成子座、柄和虫体三部分，然后再将子座切成5-6块、柄部3-4块、虫体8-9块作为接种体，分别接种于10g胨/1000ml PDA或10g蚕蛹煎汁/1000 ml PDA上（试验中发现二者对菌生长几无差别），置20温箱中培育。此外，在北京还按上述方法少量地将虫体进行组织分离、或将子座和虫体用无菌镊子掰开，直接取其中心白色菌丝组织接种于培养基上。（三）子囊孢子分离　　在康定点上取含子囊孢子待放的子座进行灭菌，在无菌条件下将整个子座的两端使悬于培养皿盖上，然后将此盖盖于盛有培养基的培盖皿上，或将子座用细线拴其柄部悬吊于陈PDA斜面试管内。以上方法均可获得子囊孢子，再经处理带回北京镜检，挑取萌发的子囊孢子分别移殖于73个斜面试管中，置20温箱内让其生长。（四）结果　　分离工作主要在康定进行，在北京也进行了组织分离和子囊孢子分离，以便获得资料与康定的相互验证。在康定的大量分离中，接种了1000多个接种体，其中有900多个发生的真菌是同一种分生孢子阶段菌。其余的近10种杂菌，大多是真菌，也有细菌，由于它们的出现没有规律性，所以易于识别和汰除。在北京进行的子囊孢子分离中，分别移殖的73个萌发子囊孢子的斜面试管，除2管污染外，只有18管长出同组织分离一致的真菌（1986年四川省中药研究所也从子囊孢子中分离到一株这种菌），其余的虽未污染却久久不再生长，嗣后取出其接种体镜检仍能清楚看到萌发的子囊孢子。另外，北京的组织分离和直接取子座中心菌块分离，以带回的材料少，仅小量地每隔1个月进行1次，但分离出的菌与康定分离的和子囊孢子分离的都是同一种菌、即使已保存9个月之久的材料分离出的也是如此。这些试验结果表明，从冬虫夏草大规模分离出的分离物90%以上是同一分种生孢子阶段的真菌，同时也表明，这种分生孢子阶段的真菌同冬虫夏草菌的有性阶段、Cordyceps sinensis（Berk.）Sacc.有着多么密切的联系。据此，我们按康定产区大量分离所获得的90%以上的菌和远离产区北京实验室组织分离和子囊孢子分离的都是这一种真菌这一事实，初步得出结论：这种分生孢子真菌是冬虫夏草菌的无性阶段。 特征和鉴定 　　冬虫夏草菌是一种嗜较低温度的真菌，15°-20为其适温，在25以上则抑制生长。在试验中将接种体虫体置于盛