RNA干扰综述.docVIP

RNA干扰综述 张林存 生技0911 0920212115 【摘要】：RNA 干扰(RNA interference ，RNAi)是与靶基因序列同源的双链 RNA 诱导的一种特异性的转录后基因沉默现象。siRNA),小干扰 RNA 与相关的蛋白质结合成 RNA 诱导沉默复合体(siRNA - induced silencing complex，RISC) , RISC识别并降解靶mRNA。现在认为 RNA干扰是真核生物共有的抗病毒、抗转座子、抗转基因和抗异常 RNA 的基因组免疫系统。RNA干扰是一项新兴的基因阻断技术，该技术已被广泛用于探索基因功能和传染性疾病及恶性肿瘤的基因治疗领域。 【Abstract】:RNA interference ( RNA interference , RNAi ) is a specific target gene sequences in double-stranded RNA - induced transcriptional gene silencing . of siRNA ), small interfering RNA and related proteins into RNA -induced silencing complex ( of siRNA - induced silencing complex RISC) and RISC to recognize and degradation of target mRNA . Now believe that RNA interference is a eukaryotic common anti-virus, anti- transposon , anti- genetically modified immune system and anti aberrant RNA genome . RNA interference is a new gene knockdown technology , the technology has been widely used to explore gene function and infectious diseases and malignant tumors of the field of gene therapy . 【关键词】：RNAi、siRNA、基因沉默 1998 年， Fire 与 Mello 将与内源性 mRNA 序列同源的双链RNA(dsRNA) 导人细胞时，发现 dsR-NA 能高效地降解该 mRNA，从而导致该基因表达的沉默;他们将此现象命名为 RNA 干扰现象[1] 。在随后的研究中发现，RNAi 广泛存在于生物界中，如果蝇[2] 、拟南芥菜[3] 及哺乳动物[4] 等。 RNAi 与真菌的共抑制 (quelling) 及植物中转录后基因沉默(post - transcriptional gene silencing , PTGS) 存在着非常相似的基因沉默机制。故推测， RNAi 是不同生物体普遍存在的从 RNA 水平调节基因表达的方式，代表了一种古老的生物途径。 1 RNAi的作用机制 RNAi 的作用过程分三个步骤: (1)较长的 dsRNA 被 RNA 核酸内切酶加工成 21-23 nt 的小干扰 RNA(small/short interfering RNA ,siRNA)。 (2) siRNA 与核酸诱导的沉默复合物 (RNA induced silencing complex , RISC) 结合。 (3) 复合物中的siRNA 中的原义链与对应的同源 mRNA 交换，原义链解离出来， mRNA 定位在原来原义链位置，进而被降解。从而在RNA水平上抑制靶基因表达。RNA干扰技术的关键就是要根据内源或外源性靶序列来设计合成21-23nt的siRNA或者环状发夹结构siRNA表达载体，以某种方式将其导入靶细胞中与靶序列mRNA特异性结合、降解，阻止靶序列继续表达和翻译。 RNAi 的作用机制被认为包括起始阶段、效应阶段、扩增和扩散阶段[7] (图 1) 。起始阶段是较长 dsRNA 在 ATP 参与下被RNaseIII 样的特异核酸酶切割加工成 21 - 23nt 的由正义和反义链组成的小干扰 RNA (small interfering RNA , siRNA)。siRNA 的两条单链末端为 5-磷酸和扛起基，且 3 .端均有 2 - 3 个突出的核昔酸。果蝇中的RNaseIII 样核酸酶称为 Dicer 0 Dicer 有解旋酶活性并含有 dsDNA 结合域和 PAZ 结构域。 Dicer 的类似物相继在拟