谷氨酰胺合成酶(GS)在大鼠正常脊髓组织内的表达.pdfVIP

- 1 - 谷氨酰胺合成酶(GS)在大鼠正常脊髓组织内的表达 周聪发1，易智华2，刘曾旭1，万丽丹1，潘爱华3 1南昌大学医学院解剖教研室，南昌（330006） 2南昌大学医学院护理系，南昌（330006） 3中南大学湘雅医学院人体解剖与神经生物学系，长沙（410013） E-mail: zcf9535@ 摘 要: 目的：探讨谷氨酰胺合成酶（GS）在脊髓的表达。方法：免疫荧光技术和免疫组 织化学技术。结果：谷氨酰胺合成酶(GS) 在脊髓灰质(前角、后角)和白质(前索、后索) 呈 点状散在分布，主要在免役阳性细胞胞体内表达，在少量免役阳性细胞突起内也表达。上述 结果提示谷氨酰胺合成酶(GS)在维持正常胞外谷氨酸浓度过程中起到重要作用,也说明其在 某些病理环境下能阻止或减缓神经元变性死亡的进程. 关键词：脊髓，谷氨酰胺合成酶，胶质细胞，神经元 0. 前言 谷氨酰胺合成酶（GS）作为一种酶几乎存在于人体内所有组织内，催化胺和谷氨酸转化 为谷氨酰胺。在哺乳动物的中枢神经系统（CNS）内，GS在脊髓、小脑、上丘、纹状体、 海马、视皮质、额感觉-运动皮质、额前皮质（嗅球）都有表达，在生长发育过程中表达都 明显递增 [1]。过去认为GS是特异性分布于星形(胶质)细胞中，被看作是星形(胶质)细胞的一 种标记物，后来Riepe[２]发现GS存在视网膜Müller胶质细胞；Monfort[３]和潘爱华[４]发现GS存 在少突神经胶质细胞内；Martinez-Hernandez[５]观察到GS在周围神经节内卫星细胞（SGCs） 有表达。人体内谷氨酸是主要的一种兴奋性神经递质,在正常生理条件下，谷氨酸通过在突 触间隙内弥散，激活受体，转运体运输，神经元和神经胶质快速摄取，在GS作用下引起谷 氨酸代谢，产生谷氨酰胺 [６]，预防在突触间隙内积累产生神经毒性效应导致神经元损伤或 死亡[ ７]。本文通过系统观察GS在脊髓组织的表达，探讨在某些病理条件下GS在脊髓内对神 经元的神经毒性保护作用。 1. 材料与方法 1.1 组织制备 随意选用体重( 200 g 左右) 健康雄性SD大鼠6只，腹腔内注射2％戊巴比妥钠（40mg/kg） 麻醉，经左心室灌注固定,取出L4-L5脊髓组织,后固定2h，用梯度蔗糖浸泡直到沉底，包埋， 冰冻切片机切片,片厚15μm。 1.2 免疫组织化学ABC法 切片漂洗、封闭，一抗小鼠抗大鼠GS单克隆抗体(BD ,1∶500),4 ℃过夜，二抗( Sigma , 1∶200) 37℃孵育2 h，ABC (Vector,1∶200) 37 ℃孵育1 h ,DAB(Sigma) 显色。梯度酒精脱水, 二甲苯透明封片。 1.3 免疫荧光法 切片漂洗、封闭，一抗小鼠抗大鼠 GS单克隆抗体(BD ,1∶500) ,4 ℃过夜，二抗( Sigma , 1∶200) 37 ℃孵育 2 h，甘油封片。 - 2 - 2. 结果 2.1 免疫组织化学ABC法 结果显示(图1) :正常脊髓横断面,低倍镜下可见GS在脊髓灰质和白质免疫反应活性阳 性，脊髓组织内GS广泛呈点状分散分布，白质内近脊髓表面表达更明显，高倍镜下可见GS 主要分布在神经胶质胞体内，突起也可见GS表达。 图1:免疫组织化学示脊髓内氨酰胺合成酶（GS）表达， 其中L代表脊髓灰质前角，R代表脊髓白质前索。 - 3 - 2.2 免疫荧光法 结果显示(图2) :正常脊髓横断面, 低倍镜下可见 GS在脊髓灰质和白质免疫反应活性阳 性，脊髓组织内GS广泛呈点状分散分布，白质内近脊髓表面表达更显著，高倍镜下主要分 布在神经胶质胞体胞浆内，突起也可见GS表达。 图2:免疫荧光示脊髓内谷氨酰胺合成酶（GS）的表达， A1和A2代表脊髓后角，B1和B2代表脊髓前角，C1和C3代表脊髓后索，D1和D2代表脊髓前索。 - 4 - 3. 讨论 在神经系统内，胶质细胞在数量上以至少10：1的比例超过神经元，早期研究已证实胶 质细胞对神经元有支持、营养、保护、传导等功能，维持神经元的正常形态和功能。本实验 通过免疫荧光技术和免疫组织化学技术两种方法发现GS在脊髓横断面灰质和白质内表达结 果很相似（见图1和图2），即GS在脊髓灰质和白质内免疫反应活性阳性，GS广泛呈点状分散 分布，且主要分布在神经胶质胞体胞浆内，突起也可见表达，说明两种不同实验技术检测的 结果具有可靠性。脊髓内主要有星型胶质细胞和少突胶质细胞，说明GS在脊髓内主要在星 型胶质细胞和少突胶质细胞的表达，与