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高粱麸皮中酚类物质的快速溶剂萃取F. Barros*, L. Dykes, J.M. Awika, L.W. Rooney.Journal of Cereal Science 58 (2013)305-312.材料与方法2.1高粱样品选取来自College Station-Texas/2010的高单宁高粱和黑高粱(A05028/RTx3362)。之所以选取这两种高粱，是因为他们酚类物质含量高且差异大；高单宁高粱的主要酚类物质是，高分子量的原花色素，相反，黑高粱主要含有小分子量的酚类物质，例如3-脱氧花青素。每次用PRL迷你去皮机(NutamaMachine Co., Saskatoon, Canada）对1 kg的高粱进行剥壳，并用KICE谷类清洗器(Model 6DT4-1, KICE Industries Inc., Wichita, KS)进行分离，从而得到麸皮。用UDY旋风研磨器(Model 3010-030, UDY Corporation, Fort Collins, CO)对麸皮（大概占原来谷物重量的10%）进行研磨并通过1.0 mm的滤网过滤。产物置于-20℃保存。2.2试剂没食子酸，水和儿茶素，福-锡二氏试剂/Foline-Ciocalteu，乙醇胺，ABTS（（2 ,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐），过硫酸钾，Trolox/水溶性维生素E（6-羟基-2,5,7,8-四甲基色烷-2-羧酸），磷酸钾，NaCl和柠檬酸均购于SigmaeAldrich (St. Louis, MO)。所有试剂都是高效液相色谱或是分析纯级别的。木犀草定氯化物，氯化芹菜定和7-甲氧基氯化芹菜定均来自于ALSACHIM (Strasbourg, France)。海沙购置于EMD Millipore Chemicals (Billerica, MA)2.3萃取方法使用装有溶剂控制器的戴安ASE快速溶剂萃取仪 ASE200(Dionex Corp., Sunnyvale, CA)。不同温度下（60℃，120℃和150℃），各种试剂（50%和70% v/v 乙醇/水，水和柠檬酸保存在pH 2.5）进行检测。少量（0.5 g）黑高粱和高单宁高粱麸皮与30 g沙子混合在22 mL的萃取室中，每个萃取室的底部都放有，硝酸纤维素滤纸。装有样品混合物的萃取室，应预先填充萃取溶剂，随后密封加压，加热。ASE的各项参数设为压强（1500 psi），一个萃取循环，冲洗体积/flush volume（70%），氮清扫时间/nitrogen purge time（120 s），静态时间/ static time（1 min）和预加热时间（0 min）。每个收集管，用去离子水定容到35 mL。样品迅速离心8 min，8000rpm。吸取悬浮液，-20℃保存在离心管中。传统的萃取方法（25℃/1 atm）也是使用上述提到的试剂，我们用其来和ASE对比一下，萃取的效率。传统的（标准）实验室萃取方法（1% HCl加入到甲醇中，70%丙酮/水）还可以和ASE来比较酚类物质的相对释放量。0.5 g的高粱麸皮和35 mL的溶剂混合在一起，混合物在室温（25℃），1 atm下，低速震荡2 h（VWR Shaker model 3500, speed #4）。随后，萃取物，8000 rpm离心8 min。吸取悬浮液，-20℃保存在离心管中。2.4 萃取物特性对采用ASE萃取法和传统萃取法，萃取出的物质，进行总的酚含量和抗氧化能力分析（等效抗氧化容量分析法/Trolox-equivalentantioxidantcapacityassay,TEAC)。用高效液相色谱法，对萃取物中的儿茶素，原花青素，3-脱氧花青素进行定量和识别分析。为了能够检测到萃取物质的产量，萃取物需进行冻干处理，产量用% w/w（冻干的萃取物的重量/麸皮重量）表示。2.4.1 总酚和抗氧化能力用Dykes等（2005）改进过的福-锡二氏试剂法（Kaluza et al.,1980）测量酸化甲醇萃取物中总酚的含量。用1.1 mL的蒸馏水稀释0.1 mL萃取物，随后和0.4 mL的福林/Folin，0.9 mL的0.5 M乙醇胺反应。室温下，反应可持续20 min，600 nm下测吸光度。酚含量应计算和表示为 mg 没食子酸当量（GAE）/ g 样品（高粱麸皮）。用Awika等（2003）的等效抗氧化容量分析法（TEAC）在体外测量萃取物的抗氧化能力。简要来说，等量的8 mM ABTS与3 mM过硫酸钾需在暗处反应至少12 h。ABTS工作液在734 nm的原始吸光度应在1.5左右。0.1 mL的水样加入到2.9 mL的ABTS工作液中，室温下暗处反应30 min。734 nm下测吸光度。抗氧化