镁离子对小鼠学习记忆影响.docxVIP

镁离子对鼠学习及记忆能力的影响理解围产期脑损伤的发病机制代表了今天的围产期医学最大挑战之一。近些年许多关于脑损伤致病源的假设都被驳倒。在过去，脑瘫（CP）几乎完全归因于围产期缺氧。但实际上，脑瘫个体中窒息可能最多只占百分之二十的原因。目前围产期感染，特别是胎儿/羊膜感染，一直涉及不同神经发育类疾病的发病机制，包括CP?精神分裂症?自闭症，和一大类广泛的行为和认知缺陷疾病。最近，流行病学研究表明，常见的孕产妇感染，包括尿，路和牙周感染，都与胎儿脑损伤有关，虽然具体的机制在很大程度上是未知的。动物研究表明，用脂多糖（LPS）模拟产妇感染/炎症能唤起胎儿系统性?羊膜和胎盘炎症的反应，最重要的是，可以增加促炎的表达细胞因子白细胞介素-6和与压力相关的肽促肾上腺皮质激素释放因子在胎儿中的表达。而胎儿的细胞因子表达的增加又与长期的脑损伤相关。因此这些发现表明产妇感染/炎症就可能引起胎儿脑损伤。直到最近还没有围产期可使用药物来预防脑损伤。一些抗炎代理已经提出，但没有关于他们受益的确凿证据。在过去的十年里，几个颇具前瞻性研究以怀孕的患者为对象，发现硫酸镁（MG）在预防白质在早产儿脑损伤中起到神经保护作用。在他们近期的研究里，对怀孕的老鼠在受孕初期18天里通过腹腔注射LPS，再利用核磁共振成像技术检测它们分娩出来的幼鼠。结果证明，注射过LPS后生下的小鼠患有不同程度的大脑白质及灰质损伤。而损伤的区域（包括背侧纹状体，内侧隔核?嗅皮质和齿状回分子）我们已知是与学习和记忆能力相关的。根据这些研究结果及对新生儿脑损伤治疗的日益迫切，他们团队寻求LPS诱导脑损伤后表现出的动物行为学特征，并且进一步研究镁离子中和或者消除这种异常行为的能力。材料与方法动物来源及处理Sprague-Dawley怀孕的老鼠（总24只，每组6只）（哈伦斯普拉格Dawley公司，芝加哥，IL）已受孕11天。并允许开始实验前有7天的适应阶段。动物保持在控制温度（37 ℃）和控制光（早上6点，开灯；下午6点，关灯）。而控制设施提供食物和水在整个研究中是随意的。生理盐水和镁离子由皮下注射，而LPS则腹腔注射给药。LPS （大肠杆菌?血清型0111：B4）利用生理盐水配制，注射量按照出生体重在500毫克/公斤。在妊娠18天，对24只老鼠（每组6只）进行注射。LPS（500毫克/公斤）或同等体积的生理盐水在时间为0。Dam被随机分配为皮下注射正常治疗生理盐水（NS）或镁离子（700毫克/公斤注射后，27毫克/公斤每20分钟）2小时前和MG或盐水2小时后。LPS（共10剂量的27毫克/公斤）注入的毫克270毫克/公斤2小时。LPS或生理盐水后注入。最后产生给药不同的四个小组：（控制：NS-NS-NS；LPS：NS-LPS-NS；MG：MG-NS-MG；LPS-MG：MG-LPSMG）。双向闪避测验研究大鼠学习和记忆能力，我们使用一个双向穿梭闪避盒子。双向穿梭回避盒，放置在一个昏暗的，通风，衰减噪声的柜子里，是一个矩形室（60，26，28厘米）但用不透明的板子分隔为小区（10，8厘米）连接2并排，同等大小的方形隔间。两个隔间的金属网格层重量敏感；微型传送信息老鼠的位置?传输和自动数据收集，包括条件刺激（CS）——声音由位于远端墙的隔间的喇叭发出，和无条件刺激（US）——电击刺激，以及记录老鼠的反应。过程每只老鼠完成一整套测试包括70个小的行为学痕迹条件作用测试。每套测试分为三个部分：条件刺激（CS），无条件刺激（US）和刺激间隔（ITI）。首先是10秒的CS声音刺激；CS停止后立刻是US，0.8mA的电刺激最多10秒；而后是ITI大约30±6秒。ITI是在两个痕迹条件测试的中间。这个时间并不确定，但要保证不能使老鼠预测到下一个测试到来的时间。老鼠相应产生三个回应：（1）回避，老鼠在得到CS声音测试后会躲进相邻的隔间，直到CS结束和ITI开始后，这样能避免电击；（2）逃跑，在电击开始后才躲进相邻的隔间，直到电击开始，结束和ITI开始；（3）无回应，包括无法跑进相邻的隔间，直到10秒电击结束后ITI的开始。因此老鼠便经历了整个电击过程。躲避/逃跑比例尺是指每个组每次测试的躲避/逃跑的老鼠平均数。实验初级结果即可衡量老鼠的学习和记忆能力。结果即躲避/逃跑老鼠的数量比总实验鼠的数量在每10个小测试里。在模型中，一个老鼠如果能躲避电击表明它有更高的学习和记忆能力。结果与分析所有组中一个月大的老鼠在经过7整个实验后学习能力得到明显提高。结果还证明LPS很明显能够使3个月大的老鼠的学习能力下降，但是在注射LPS后加入镁离子却能够完全消除这种下降程度。令人惊奇的是，在实验最后LPS-MG组的学习能力是最强的。之前核磁共振实验结果表明，对怀孕十八天的老鼠注射LPS可以诱导25天大的幼鼠产生大脑白质和灰质的损伤。