蛋白质检测方法详解.ppt

偶氮染料 方酸菁染料 酞菁染料 基于AIE机理检测蛋白质 此外，小分子荧光探针还可基于荧光能量共振转移(fluorescence resonance energy transfer, FRET),光诱导电子转移 (photo-induced electron transfer PET）, 分子内电荷转移( Intramolecular charge transfer , ICT)等效应对蛋白质进行选择性识别 基于自组装机理检测蛋白质 超分子化学：分子聚集体结构和功能为研究对象, 旨在研究分子基于弱相互作用的组装、自组装和自组织行为,并研究这些行为可能带来的结构和功能的改变,以期建立结构和功能之间的关系。超分子的组装的实现依赖于分子间键. 它包括氢键、范德华力、亲脂-疏水作用、金属离子的配位键、π-π堆积作用等 Palapuravan Anees, et al. J. Am. Chem. Soc. 2014, 136,13233?13239 比色/比率型荧光探针检测蛋白质 利用催化消除氨基甲酸酯保护基团合成了反应型探针，BSA的存在使得氨基萘二甲酰亚胺的绿色荧光增强，根据溶液颜色变化和荧光强度比值识别并定量检测。 X. Zhang. et al. Analyst, 2011,136(19):4008-4012. 基于荧光有机纳米材料检测蛋白质 纳米材料，是指在三维空间中至少有一维处于纳米尺度范围（＜100 nm）或由该尺度范围的物质作为基本单元构成的材料。纳米材料的特殊结构，使其具有不同于常规材料和单个分子的一些特性，主要包括比表面积大、高化学活性、特殊的光、电、磁性质等。而荧光纳米材料，由于其特殊的结构与光学特性，为化学、物理、医学和生物领域的发展带来了新的机遇。 半导体量子点 量子点是主要由Ⅱ-Ⅵ族及Ⅲ-Ⅴ族元素构成的半导体纳米颗粒。量子点在研究蛋白质方面具有许多优势。首先，可以用同一激发波长的光源同时激发多种不同荧光的量子点，并且由于其发射谱带窄而对称，多种颜色的发射峰不易出现重叠与红移拖尾，荧光光谱易于区分和识别。另外，量子点的斯托克斯位移较大，可以有效避免激发峰与发射峰的重叠，减少干扰。此外，量子点的光学特征可以通过控制反应条件有效控制 量子点荧光可调的光学特征为蛋白质多色标记及同步检测奠定了基础。 嵌入式核壳荧光纳米颗粒 嵌入式核壳荧光纳米颗粒是指一些负载有机荧光染料分子的无机纳米颗粒或多聚生物大分子包被型纳米颗粒。这种材料在蛋白质标记成像中有固有优点。 首先，纳米颗粒对内部所包裹的荧光染料有保护作用，使其荧光稳定性增强，可以克服外界环境对荧光材料的影响。 其次，一个纳米颗粒内所包裹的荧光分子往往多达几千甚至几万个，因此，更多的荧光分子可以连接在生物分子上，当产生信号响应时，很多荧光分子同时产生荧光信号，起到了信号放大的作用，从而提高检测灵敏度 碳点 碳点是一种近似球型且直径小于10 nm的零维半导体纳米晶体，是由极少分子或是原子组成的纳米团簇。荧光性能是碳点最突出的性能，碳点具有荧光稳定性高、荧光波长可调、抗光漂白能力强、激发光宽且连续、能够实现一元激发、多元发射等特点。 制备碳点的碳源来源丰富且价廉、毒性低。利用碳点表面的—NH2和—OH，在碳点表面接上对生物分子有特异性识别作用的核酸适体或分子印迹聚合物，可提高分析的灵敏度和选择性。在蛋白质研究中，碳点通过与蛋白质的作用，改变了表面电子空穴对之间的复合效率，从而发生荧光的增强或猝灭，实现对蛋白质的标记和分析。 贵金属元素纳米簇 贵金属元素纳米簇的尺寸通常小于2 nm，具有强的可见-近红外荧光。同其他荧光纳米材料相比，贵金属元素纳米簇更加稳定，分散性更好。 近几年来，贵金属纳米簇分子桥的研究是一大热点。由于金属纳米簇的低毒性，近红外光谱特征，超小尺寸及优良的荧光性质，它们已广泛用于蛋白质检测、标记成像及蛋白质间相互作用的研究领域。 磁性荧光纳米颗粒 磁性荧光纳米颗粒是一种结合了磁性和发光性能的 纳米材料。磁性荧光纳米材料集合了磁性纳米颗粒的快 速磁响应性以及荧光材料的光致发光能力，在分离的同 时还能进行光学检测。 蛋白质与疾病的关系 妊娠期高血压疾病 妊娠期特有的疾病，发生率为 9. 4% ～ 10. 4% ，可导致脑出血、脑水肿、心力衰竭、肺水肿、新生儿死亡等不良妊娠结局，尤其是早发型重度子痫前期，是导致产妇及新生儿死亡的主要原因之一，严重危害母婴健康。该疾病以“妊娠20周后高血压、蛋白尿、水肿”为主要表现。（正常人每日自尿中排出约40-80mg蛋白，上限不超过150mg，其中主要为白蛋白，其次为糖蛋白和糖肽。）通过检测尿蛋白含量，可以有