浙江大学生物化学实验甲 奥赛-质粒DNA的小批量提取与酶切鉴定幻灯片.pptVIP

质粒DNA的提取与酶切鉴定 （一）质粒DNA的提取与电泳鉴定 1、质粒简介 质粒是一种寄生性的自主复制子，存在于细菌等细胞中，为双链闭环的DNA分子，大小为1kb~200kb之间，具有自主复制和转录的能力，但其复制和转录要利用宿主细胞（细菌）编码的一些酶和蛋白质。 2、分离纯化质粒的原理 分离纯化质粒DNA主要是利用宿主细菌DNA与质粒DNA之间的差异来进行的。 （一）质粒DNA的提取与电泳鉴定 细菌DNA与质粒DNA形状上均为双链环形，但二者的分子量相差较大，细菌DNA的分子量在109D左右，而质粒DNA的分子量仅为106 ~107D， 提取纯化质粒的过程中，细菌DNA大多断裂成线状分子，而质粒DNA则多数仍为双链环状，从而即可将二者分开。 本试验采用微量碱变性法来分离纯化质粒DNA，具体的分离纯化原理如下： 0 （一）质粒DNA的提取与电泳鉴定 质粒DNA的天然结构为共价闭环（超螺旋）结构，但在制备过程中，由于各种因素的影响，同一质粒DNA的分子可能呈现出如下几种构型： ①超螺旋型（共价闭环）质粒DNA：（cccDNA）超螺旋状。 ②开环质粒DNA：（ocDNA）质粒DNA的两条链中有一条链发生一处或多处断裂，从而形成松弛的环状分子。 ③线状质粒DNA：（linearDNA）质粒DNA的两条链在同一处断裂，从而变为线状分子。见图1 （一）质粒DNA的提