细胞凋亡、周期检测讲述.pptVIP

产品编号 产品名称 包装 规格 品牌 应用 方法 4812-30-K TdT In Situ Apoptosis Detection Kit - FITC 30T RD FCM 556405 Apoptosis Detection Kit (APO-BRDU) 60T BD FCM 4810-30-K TdT In Situ Apoptosis Detection Kit - DAB 30T RD IHC K403-50 ApoBrdU-IHC DNA Fragmentation Assay Kit 50T Biovision IHC 核内DNA事件之 明星产品 不同时期凋亡的检测指标的选择 早期：Annexin V 早中期：Cytochrome C 和线粒体相关 中晚期：Caspase-3, 8, 9, other proteins 晚期：DNA Fragment 检测水平 细胞 核酸 细胞膜 胞内通路 线粒体 检测方法 免疫荧光 TUNEL法 Annexin V/PI Caspase 通路 线粒体膜电位 细胞凋亡之总结篇 细胞生命活动之：细胞周期 2.1细胞周期 细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程，分为间期与分裂期两个阶段。 利用特殊的荧光染料(PI等)与细胞内DNA碱基结合，被这些荧光染料染色的细胞在激光照射下发射出荧光，荧光强度与DNA含量成正比。流式细胞仪通过测定细胞的荧光强度推算出细胞的DNA含量。 2.1.1细胞周期检测原理 细胞周期的样本制备 样本来源 ? 培养的细胞、血液、骨髓、体液、灌洗液、外科手术活检、细针穿刺物等的细胞都可用来做DNA分析。 ? 新鲜的、冰冻或固定保存的、或常规固定/包埋用于组织检查的样本均可。通常最好的结果来自新鲜标本。 ? 标本的细胞数应106 注意事项： 获得单个细胞，尽量避免DNA的降解 ? 样本最关键的就是减少碎片（EDTA/不可过度吹打/离心rpm） ? PI既能与DNA结合，又能与RNA结合，所以要用RNase降解 ? PI质量及RNase所加量很重要，建议用商品化试剂 ? 污染脱氧核糖核酸酶会降解DNA，故玻璃器皿和试剂要干净灭菌 细胞周期样本检测 注意事项： 1. 进样速度：一般检测细胞浓度调整为2E5–2E6/ml，进样速度为低速。若峰形较宽，可能就是进样速度太快 2. 仪器质控定期做，尽可能排除因机器设置引起的峰形加宽 3. 排除粘连细胞（FL2-A/FL2-W） 通过电压脉冲信号的宽度和面积区别实体组织标本中的粘连细胞群体，最大程度的减少粘连细胞带来的假阳性结果 细胞周期样本检测 DNA检测的常用术语 1. 变异系数（Coefficient of Variation，CV） ? 表示流式分析中DNA含量的分 辨率或精确度。 ? 通常由G0/G1峰的CV来反映 【%CV=（SD/mean）x 100】 ? 影响CV的因素主要包括两方面 ：仪器因素（如液流、光路、机 器调试等）和样本制备及染色过 程对标本的人为影响。优化 DNA分析条件就是指最大程度 地减少这两大因素带来的变异。 P.S. CV在5%的精度足够，CV值的可信度在8%以内，但要视样本的固定和染色方法而定 结果分析 CellQuest、WinMDI等软件均可以进行分析，但需要 手工进行参数统计和计算； 推荐使用ModFit分析软件（分析如下：） 1. 打开软件； 2. 在FL2-W/FL2-A散点图中设定单个细胞门（R1），去除聚集细胞，必要时可以设两个门。 3. 在FL2-A直方图中显示R1中细胞的DNA含量直方图 备注：该软件可以自动分析，也可手动分析；可以分析凋亡、异倍体、各期比例等；结果均自动计算。 结果分析 正常细胞周期分析 肿瘤组织中的各种DNA倍体 肿瘤细胞 细胞周期与肿瘤 辅助肿瘤早期诊断与鉴别诊断 研究药物对细胞周期的影响 细胞周期与药物研发 * 流式图结果正确？修改 * 对应产品 * CST的产品 * Caspase挂图 * WB产品 * IHC产品 * 流式产品 * 细胞周期的概念 * 流式图解读，重要参数 * 添加特色产品介绍 * 细胞生命活动之 --细胞凋亡、细胞周期 细胞凋亡（ Apoptosis）概念 为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序死亡。是机体主动、高度有序清除无用细胞过程。是生物体中一种普遍存在的现象。 与细胞坏死 (Necrosis) 相区别，坏死是细胞受到强烈理化或生物因素作用引起细胞无序变化的死亡过程。 细胞凋亡生理意义 ? 蝌蚪尾的消失 ?脊椎动物的神经系发育 约50