藜麦叶片多酚最佳提取工艺及其抗氧化性研究讲述.pptx

藜麦叶片多酚最佳提取工艺及其抗氧化性研究 粮食工程14EIE 季静雅 材料、试剂和仪器 1. 1材料和试剂 选用品种“PI596498”为试验材料进行多酚最佳提取条件研究。同时精选田间性状较好的9个黎麦品种:TEMUCO Quinoa TRADITIONAL, Quinoa B.Rain Sow , Temuco;1591 Quinoa Cherry , Tomico Quino-a, CQ一TEMVCC(夭玛)，PI814932 , PI596293 , Tumu-co ( 7 ) hybrids。供试材料均由海西海航生态农业科技有限公司和浙江农林大学提供。 没食子酸标准品和Folin一Ciocalteu、显色剂:上海源叶生物科技有限公司;DPPH (1,1一biphenyl一2-picrylhydrazyl radical ):东京化成工业株式会社。 1.2仪器设备 SHZ一D IQ予华牌循环水真空泵:巩义市予华仪器有限责任公司;752PC紫外可见分光光度计:上海光谱仪器有限公司;SY一150 W超声波:上海宁商超声仪有限公司。 试验方法 1材料预处理 黎麦盆栽种植40 d后，即植株处于生长发育阶段的开花期，分别摘取10个不同品种的新鲜叶片，于阴凉通风处晾干后，置80℃鼓风干燥箱烘干，待冷却后粉碎过0. 5 mm孔筛，密封干燥备用。 2标准曲线的制备 参考陆国权等标准曲线的制备，得到的标准曲线方程是:Y=0.075 1X一0. 008 3 ,R2= 0.9989 3多酚的提取和测定 取0. 5 g黎麦叶粉末置于250 mL圆底烧瓶中，加人一定体积分数的乙醇在一定条件下回流浸提，并将浸提液进行减压过滤后收集。 取不同条件下的提取物1 mL定容至10 mL，然后从中取0. 2 mL提取物按照上述标准曲线的测定方法测定样品液的吸光度，并根据线性回归方程计算多酚提取得率，3次重复取平均值。 4单因素试验 试验对乙醇浓度、提取时间、料液比进行单因素分析，分别考察这3个因素对黎麦叶片多酚提取的影响。 5试验设计 根据单因素试验结果，以乙醇浓度、浸提时间、料液比3个因素为自变量，多酚得率为响应值进行三因素三水平响应面试验。通过Design Expert8.0.6软件对试验数据进行回归分析，得到黎麦叶多酚提取的最优工艺参数。 6清除DPPH·的测定 准确称取DPPH·标准品10 mg，溶于无水乙醇中，超声5 min，充分震荡，并定容于100 mL容量瓶中，配成0. 1 mg/mL DPPH·储备液，置于冰箱中备用。取不同质量浓度的黎麦叶多酚提取液2 mL，分别加人0. 1 mg/mL DPPH·溶液2 mL，摇匀，在黑暗中放置30 min，以无水乙醇为空白在波长517 nm处测定其吸光度A样品，用无水乙醇代替DPPH·溶液按上述方法测定吸光度A对照，用无水乙醇代替黎麦叶多酚提取液按上述方法测定吸光度为A空白。按公式计算DPPH·清除率。 DPPH·清除率= (1一((A样品一A对照)/A空白)x 100% 7清除·OH测定 在试管中依次加入2 mL 6 mmol/L FeS04溶液，2 mL不同质量浓度的多酚提取液，2 mL 6 mmol/LH2 02溶液，摇匀，静置10 min，再加人2 mL 6 mmol/L水杨酸溶液，摇匀，静置30 min，以蒸馏水为空白于波长510 nm处测定其吸光度A样品，用蒸馏水代替水杨酸按上述方法测定吸光度A对照，用蒸馏水代替多酚提取液按上述方法测定吸光度A空白。按公式计算·OH清除率。 ·OH清除率=(1一((A样品一A对照)/A空白)x 100% 8黎麦叶片多酚含量的品种间差异 采用所筛选的最佳提取条件和方法测定所选9个黎麦品种，以明确黎麦叶片多酚含量的品种间差异。 结果与分析 1多酚得率的单因素试验 1.1乙醇浓度对多酚得率的影响 以料液比为1:40，在80℃条件下提取1h， 考察不同乙醇浓度对多酚得率的影响(见图1)。 结果表明，多酚得率随乙醇浓度的增加呈现先 上升后下降的趋势，乙醇体积分数在85%时达 到最大值，故确定乙醇最佳体积分数为85 %。 1.2浸提时间对多酚得率的影响 以70%乙醇、料液比1:40为提取溶剂量，在 80℃下浸提，考察不同提取时间对多酚得率的影响(见图2)。结果表明，多酚得率随着时间的推迟而呈现出“M”的趋势。在1h提取多酚得率最高，为缩短工时和能耗，提取时间以1h为宜。 1. 3料液比对多酚得率的影响 以乙醇浓度为70%在80℃条件下浸提1h，考察不同料液比对多酚得率的