罗氏方法学评价与性能验证方案.pdfVIP

定量检测方法线性评价 (EP6-A) 1. 操作流程 1.1. 时间要求（Time requirements） 包括对仪器设备熟悉时间，线性实验应在短时间完成。理论上所 有数据应在一天内完成。 1.2. 实验条件的评估（Evaluating Experimental Conditions） ? 实验室只是验证线性范围，那只要在该范围内使用 5-7个浓度，每个浓 度做 2个复管。 ? 如果是新方法要建立线性范围，就要在预期测量范围内使用 7-11个水 平。或者设定比预期水平更宽（20%-30%）的浓度水平，来确定线性范围。 要求每个水平做 2-4个复管。 ? 本实验采用的多项线性回归至少需要 5个浓度水平。测试浓度越多，能 更好描述线性及说明更宽的线性范围。 本操作建议通过高值和低值混合血清以不同比例混合，等距离划分各水 平间浓度。当然也可以是各浓度不是平均划分。注意：准确吸样可以减少误差。 1.3. 基质的选择：按下例顺序选择理想基质 1） 患者血清是最理想的基质。即选择患者高值血清以及低值血清，将高值与低 值按比例进行线性稀释。 2） 用推荐稀释液稀释患者血清：用厂商指定的或者由实验室证实的推荐稀释液 对患者高值血清进行线性稀释。 3） 在患者血清中增加分析物：如果加入物中不含有干扰物质，则对加入的分析 物无需高纯度级别。如果存在干扰物质，那么就必需在报告中注明如来源、 纯度、预期效应等。如果是使用的高浓缩液体分析物，则加入混合血清的量 要越少越好（10%），并做好记录。 4） 用低浓度的处理物质或处理过的混合物质稀释的血清：若要使用低浓度的患 者血清，可通过如透析、热处理、层析等方法降低分析物浓度。注意这会改 变原血清的基质环境。 5） 商品化的质控/校准品/线性物质：用高值质控品和低值质控品 6） 用生理盐水或其他稀释液而不是推荐稀释液稀释的混合血清会引起基质效 应，应尽量少用。 7） 过度稀释的商品化质控品：会引起基质效应，应尽量少用。 8） 液体溶液：尽管高纯度物质是首先的，因为可以减少方法学干扰的可能性， 但是稍低纯度的物质也是可以接受的。 9） 其他的溶剂：有机溶剂的使用更可能发生基质效应。 1.4. 分析顺序 保证随机。如果出现明显的携带污染(carry over) 或漂移 (drift)，线性结果 不准确。 2. 数据分析 2.1. 数据的初步检查 （1） 检查有无误差特别明显的点，找出是否存在分析或技术原因，找出原因 后重做线性实验。 （2） 若没有分析或技术原因造成的误差点。观察在每个水平检测值是否可能 有离群点（outliers）。画出 XY图。横坐标为各浓度水平（x），纵坐标 为每个水平下的各个复管检测值（y），并作出均值点。观察线性的总体 离散度、错画的点、明显的转换错误、仪器的差错。 2.2. 线性范围的决定 本方案运用多项回归法（polynomial regression），首先假定所 有数据是非线性的，并且排除随机误差。统计步骤有两步。第一步：数据模型是 否符合线性还是非线性。第二步：如果符合非线性，那么比较非线性和线性之间 差异是否能够符合该方法预设的允许误差内，如果在该允许误差内，即使统计学 检出非线性，仍按线性范围处理。 多项回归：包括一次项（first order），二次项（second order）和三次项（third order）。如下所示： 1st order：是线性。 2nd order：是上升/下降型抛物线。 3rd order：乙状或 S 型曲线。 回归系数用 bi表示。2 nd order中，b2是非线性系数。3 rd order中，b2和 b3是非 线性系数。通过相关统计软件可计算出每个非线性系数斜率的标准误 SEi。从而 进行 t检验。 无效假设为 b2/b3与 0无差别， t=bi/ SEi 自由度 df=L*R-Rdf L: 有几个浓度水平。 R: 每个水平所做的复管数 Rdf: 回归分析的自由度 举例：如有 5个浓度水平，每个浓度做两个复管，对于 3rd order则 df=5*2-4=6。 查 t值表，若 tt0.05,则 P0.05。回归系数 bi=0。根据 P值确定 b2 和 b3是否 有意义，是否具有统计学上的非线性。 2.3.4 非线性度的估计