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分子生物学复习提纲 一、重组DNA技术 1、基本概念 1) DNA克隆：获得DNA相同副本或拷贝的过程。 2) 基因工程： 实现基因克隆所用的方法及相关的工作称基因工程，又称重组工艺学。 3) 限制性核酸内切酶：是一类能识别双链DNA分子中的某些特定核苷酸序列，并由此切割DNA双链结构的核酸内切酶。 4) DNA载体：携带目的基因，实现其无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的一些DNA分子。 5) DNA体外重组：在DNA连接酶的催化作用下，将外源DNA分子（目的基因）与载体DNA分子连接成一个重组分子的过程。 6) 粘性末端：在双链DNA分子的末端，有一条链的3’或5’端比另一条链的3’或5’端要长，这样的双链DNA分子的末端称为粘性末端。 7) 基因组DNA文库：存在于转化细胞内由克隆载体所携带的所有基因组DNA的集合。 2、重组DNA技术的基本过程 1) 分 2) 切 3) 接 4) 转 5) 筛 6) 表达 3、重组DNA技术中常用工具酶有哪些？各有什么特点和作用。 限制性核酸内切酶：识别特异序列，切割DNA。 DNA连接酶：催化DNA中相邻的5′磷酸基和3′羟基末端之间形成磷酸二酯键，使DNA切口封合或使两个DNA分子或片段连接。 DNA聚合酶： 以DNA为模板合成双链DNA分子。 4、作为基因工程载体所需具备的基本条件： 1) 能自主复制 2) 有多个单一酶切位点，称为多克隆位点（MCS），利于外源DNA分子插入 3) 具有两个以上的选择性遗传标记，便于重组体的筛选和鉴定 4) 分子量小，以容纳较大的外源DNA 5) 拷贝数高 6) 具有较高的遗传稳定性 人工染色体载体包含的调控元件 7、人工接头有什么特点？有什么用途？ 人工接头特点：有限制性核酸内切酶的酶切位点 人工接头用途：在平末端上形成粘性末端 8、宿主细胞应具备的条件 1) 处于感受态 2) 对载体无严格限制 3) 限制酶和重组酶缺陷 4) 不对外源DNA进行修饰 5) 能表达重组体所提供表型特征 9、原核表达体系有什么特点？ 其优点：简单、迅速、经济、适合大规模生产 。 不足： 1) 不宜表达真核基因组DNA； 2) 不能加工表达的真核蛋白质； 3) 表达的蛋白质常形成不溶性包涵体； 4) 很难表达大量可溶性蛋白。 10、真核表达体系（酵母、昆虫、乳类动物细胞）有什么特点？ 优点： 1) 可表达克隆的cDNA及真核基因组DNA 2) 可适当修饰表达的蛋白质 3) 表达产物分区域积累 缺点：操作技术难、费时、不经济 二、基因表达调控与基因诊断 （一） 概念： 基因表达、基因表达的时间特异性、基因表达的空间特异性、组成性表达、诱导性表达、阻遏性表达、协调性表达、管家基因、启动子、增强子、沉默子、操纵子、顺式作用元件、顺式作用蛋白、反式作用因子、Ｃ值矛盾、反义RNA、基因诊断、单基因病、多基因病、 获得性基因病、疾病的表型诊断 （二） 简答或论述 1.举例说明基因表达调控的生物学意义 2.怎么理解基因表达调控的复杂性 3.简要说明基因转录起始调控的基本要素 4.原核基因转录调控有何特点 5.试解释乳糖操纵子的负性调节和正性调节 6.简述真核生物基因组的结构特点 7.简述基因诊断的特点 8.简述基因诊断的应用 9.简述基因诊断的原则 三、分子生物学“基因诊断及基因治疗”试题 （一）名词解释： 1、基因诊断：指应用现代分子生物学和分子遗传学的技术方法，直接检测人体基因结构、表达水平及其产物是否正常，从而对疾病做出诊断的方法称为基因诊断（gene diagnosis）。 2、自杀基因：又称为前体药物酶转化基因，这种基因导入受体细胞后可产生一种酶，将原来无细胞毒性或低毒药物前体转化为细胞毒物质，使导入自杀基因的细胞“自杀”。 3、SSCP：即单链构象多态性诊断法，用来分析相同长度的单链DNA由于碱基序列的不同，甚至是单个碱基不同，所引起的构象差异。这种差异将造成相同或相近长度的单链DNA电泳迁移率不同，从而可用于DNA中单个碱基的替代、微小的缺失的检测。 4、基因治疗：将人的正常基因或有治疗作用的基因通过一定方式导入人体靶细胞纠正基因的缺陷或发挥生物学效应，达到治疗疾病目的的生物医学技术。 5、基因增补：指不去除异常的基因，仅通过外源基因的非定点导入，使其在靶细胞中能表达正常产物，补偿缺陷基因的功能。 （二）简答题： 1．基因诊断与传统诊断方法有何区别，其特点是什么? 答：传统诊断方法是通过表现型推测基因型，而基因诊断是从基因型诊断推测表现型，即绕过基因产物，通过直接探查基因进行诊断，不受细胞类型和发病年龄的限制，可用于一切遗传病的诊断。 特点：（1）针对性强；（2）特异性高；（3）灵敏度高。（4）早期诊断（5）适应性强。