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生物化学实验报告 姓 名： 范嘉俊 学 号： 3140070081 专业年级： 2014级中西医临床五年制 组 别：  FORMTEXT
第四实验室 生物化学与分子生物学实验教学中心 实验名称 (Title of Experimetn)肝糖原的提取、鉴定与定量实验日期 (Date of Experiment)2016-01-07实验地点(Lab No.)第四实验室合作者(Partner)刘海指导老师(Instructor)殷志新总分 (Total Score)教师签名(Signature)批改日期 (Date)1.实验原理 （1）肝糖原提取与鉴定 ①提取： 1.糖原储存于细胞内，采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎，释放出糖原。 2. 5%三氯醋酸溶液能使用糖原与蛋白质分离，糖原保存于上清液，而蛋白质沉淀。 3.糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95％乙醇将滤液中糖原沉淀，再溶于热水中。 ②鉴定： 糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。糖原还可被酸水解为葡萄糖。利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的存在。 （2）肝糖原定量测定 糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糖醛衍生物—5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。该物质在620nm处有最大吸收。糖含量在(10~100)mg范围内，溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色，通过标准对照法（直接比较法）即可计算出样品中糖原的含量。糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前，肝组织先置于浓碱中加热，以破坏其它成分，而保留肝糖原。 2.实验材料 （1）实验样品：鸡肝。 （2）主要试剂： 肝糖原的提取与鉴定： 95%乙醇，0.31mol/L(5%)三氯醋酸溶液， 0.15mol/LNaCl溶液， 浓盐酸，NaOH溶液， 碘试剂。 肝糖原定量测定： 30%KOH溶液，0.5mg/ml的葡萄糖溶液， 蒸馏水，蒽酮显色剂。 （3）主要仪器与器材：可见光分光光度计， 恒温水浴箱， 试管架，三支支试管， 加样枪，加样枪架， 普通离心机， 研钵， 刻度吸量管， 白瓷反应器， 100ml容量瓶。 3.实验步骤 （1）实验流程 ①肝糖原的提取与鉴定 注意事项： ①在提取肝糖原中，向上清液中加入乙醇后，要充分混匀（可以用玻璃棒搅拌）。 ②糖原中葡萄糖螺旋链吸附碘产生的颜色与葡萄糖残基的多少有关。肝糖原分支中葡萄糖残基在20个以下，吸附碘后呈现红棕色。 ③糖原水解液中葡萄糖的鉴定一步，加班氏试剂不能过量，否则反应液呈黑色浑浊，观察不到应有的结果。 ②肝糖原的定量测定 步 骤操作糖原提取在试管中加入30%KOH1.5ml，在称取0.10～0.15g肝组织放入试管中，置沸水浴中15min。取出后冷却，将管内容物全部移入100ml容量瓶，定容，摇匀。糖原的测定取3支试管，按下表操作：试剂（ml）空白管标准管样品管蒸馏水 1.0--标准葡萄糖溶液-1.0-糖原提取液--1.00.2%蒽酮溶液2.52.52.5混匀，沸水浴10min，冷却。在分光光度计620nm波长处，用空白光溶液调零，测定个溶液的吸光光度（A）。 计算出样品肝糖原含量。注意事项： ①肝组织必须在沸水浴中完全溶解，否则影响比色。 ②注意要全部溶液，用水多次洗试管，一并收入容量瓶中。 ③蒽酮溶液必须2倍于被测液。 ④若肝糖原含量小于1%，须改用间接测量法，即肝组织消化后，用95%乙醇沉淀糖原。 4.实验记录 实验中观察到的现象 （1）糖原的提取与鉴定 ①鸡肝上清液经乙醇处理，离心后得到微量的白色沉淀物。 沉淀 上清液 ②糖原溶解液滴加碘液后，对比纯碘液，有红棕色物质生成。 纯碘液 红棕色物质 ③用班氏试剂与糖原水解液反应，混匀后沸水浴2min，发现管壁有砖红色沉淀。 反应前 反应后 （2）肝糖原定量测定 加蒽酮试剂的糖原溶液（水浴后）： 样品管 标准管 空白管 可见：空白管中为浅黄色；标准管中为蓝绿色；样品管中为浅绿色。 3.原始实验数据： 620nm波长吸光值记录表 测定次数各管吸光值（A620）空白管标准管样品管100.6540.098200.6540.098300.6530.098各管平均值62000.65370.0985.结果与讨论： 1.结果 ①由碘液反应结果可知，鸡肝中存在少含量的肝糖原。 ②肝糖原含量