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2012年福建省各地市5月份质检选修试题 2013．9．17 1．人外周血单核细胞能合成白介素2（IL－2），该蛋白可增强机体免疫功能，但在体内易被降解。研究人员将IL－2基因与人血清白蛋白（HSA）基因拼接成一个融合基因，并在酵母菌中表达，获得具有IL－2生理功能、且不易降解的IL－2－HAS融合蛋白。其技术流程如图。请回答： （1）培养人外周血单核细胞的适宜温度为 ℃；图中②表示 过程。 （2）表达载体1中的位点 ，应为限 制酶Bgl Ⅱ的识别位点，才能成功构 建表达载体2。 （3）表达载体2导入酵母菌后，融合基因转录 出的mRNA中，与IL－2对应的碱基序列 不能含有 （起始/终止）密码子，才 能成功表达出IL－2－HAS融合蛋白。 （4）应用 杂交技术可检测酵母菌是 否表达出IL－2－HAS融合蛋白。 2. 低温伤害是农业生产中的一种严重自然灾害。种植在北部寒冷地带的烟草，其抗冻性是选育寒冷地区作物品种的一个重要指标。科学家将昆虫抗冻蛋白基因转移到烟草中，明显提高了烟草的抗寒能力。下图是获取转基因抗寒烟草的过程示意图，请据图回答下列问题： （1）PCR 扩增过程中引物对是根据 序列合成。PCR 扩增过程可以重复循环进行，从理论上推测，第二轮循环产物中含有引物a 的DNA 片段所占的比例为 。 （2）农杆菌Ti 质粒中的 能够插入其中的抗冻蛋白基因转入番茄细胞的染色体DNA 上。 （3）过程①应用了 技术，要鉴定转基因抗寒烟草是否具有抗寒性，个体水平的鉴定方法是 。 3.将已经导入人乳铁蛋白基因的山羊胚胎细胞和乳腺上皮细胞作为供体细胞，利用体细胞核移植技术，分别将等量的上述细胞核移植到山羊MII期去核卵母细胞内，形成克隆胚，经体外培养后，得到囊胚，结果如下表。 转基因供体细胞 克隆胚（个） 囊胚率（%） 乳腺上皮细胞 93 8.60 胚胎细胞 119 15.13 请回答： （1）导入人乳铁蛋白基因后，需将两种供体细胞分别放入特定的选择培养基中培养，筛选出含有 的供体细胞。 （2）若要对转基因供体细胞的DNA进行PCR检测，需将DNA加热至90～95℃，目的是__ __ （3）两种转基因供体细胞经诱导后，能检测到人乳铁蛋白的应是____细胞。 （4）分析上表结果得出：胚胎细胞核移植的难度____（大于／小于）乳腺上皮细胞核移植，其判断依据是 。 4.奶牛乳房炎是奶牛业危害大、常见、经济损失较严重的疾病之一。抗生素的使用易在奶牛体内残留，影响畜产品质和人类健康。溶菌酶具有抗菌、抗病毒和增强免疫力的功能，在动物的组织器官粘膜上广泛分布和表达。我国科学家设想利用转基因技术生产出在乳腺中能特异表达人溶菌酶基因的转基因克隆奶牛，目前已获得转基因克隆胚的囊胚。请回答有关问题： （1）构建乳腺特异性表达载体，其中人溶菌酶基因（hLYZ）是__ __绿色荧光蛋白基因作为 ，为保证可以通过乳汁分泌获得溶菌酶，启动子采用 基因。 （2）采用显微注射技术将基因表达载体导人荷斯坦牛胎儿细胞。 （3）将转基因胎儿细胞注入到__ __细胞中，完成核移植。 （4）筛选绿色荧光转基因胚胎培养。科学家现已培养至囊胚阶段，最后还要应用 技术以获得转基因奶牛。 5、胰岛素类似物－门冬胰岛素是用天冬氨酸取代人胰岛素β链28位上的脯氨酸而合成的，是自然界中不存在的蛋白质，它与人胰岛素相比，减弱了溶液中胰岛素分子间的结合强度，为超短效胰岛素。下图是生产门冬胰岛素过程示意图。 （1）过程Ⅰ常用 的方法获得门冬胰岛歌词原基因，过程Ⅱ使用的工具酶有 （2）在基因表达载体中，门冬胰岛素原基因首端必须有 ，才能使该基因在受体细胞中表达。过程Ⅲ常用 处理受体细胞，使其成为感受态细胞。 （3）上述获得门冬胰岛素的生物技术主要是 。 6.下图是利用现代生物技术改良草莓品系的过程： （1）欲获得抗虫草莓可从蛋白酶抑制剂基因、生长素诱导基因中选择 作为目的基因，要鉴定草莓的抗虫性，从个体水平上可采用 实验。 （2）Ⅱ过程常规方法采用杂交育种，还可先用花药离体培养获得2n和4n的草莓，再用 技术获得同时具凤梨风味和抗虫特性的草莓，该技术常用的酶有 。