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富含维生素A 的黄金大米 “黄金大米”是一个水稻品种，它富含β-胡萝卜素（预成维生素A），可以治疗维生素A缺乏症，它的贡献已被预测，通过提高β-胡萝卜素含量可以减轻维生素A缺乏症。我们假设：编码水仙基因的八氢番茄红素合成酶（PSY），将其中的两个基因转入黄金大米中来提高β-胡萝卜素的含量。经过系统的测试多种植物的八氢番茄红素合成酶 ，我们确定了来自玉米的八氢番茄红素合成酶的效果最好。我们发展了第二代“黄金大米”，引入编码八氢番茄红素脱氢酶的crtI结合噬夏孢欧文氏菌的胡萝卜素，用于生成原黄金大米。第二代“黄金大米”中胡萝卜素的含量是第一代“黄金大米”的23倍，达到37μg/g。 图1玉米愈伤组织的PSY基因的表达提高类胡萝卜素含量。（一）示意图玉米愈伤组织的在两个质粒在基因盒中指定片段。两者都包含玉米的启动子的子 (Ubi1)和终止子（NOS）。（i）本相??图7构建的质粒与下面列出的各物种的八氢番茄红素合成酶的编码区（PSY） 。（ ii）本膦N-乙酰转移酶（ PAT ）选择标记和β-葡萄糖醛酸酶（GUS）基因盒。（二）质粒含有玉米PSY （右ZM PSY ）和空载体（EV）（左）的照片显示个别玉米愈伤组织共转化。（三）直方图显示的总颜色的类胡萝卜素含量的玉米愈伤组织转化的一个给定的的PSY基因（来自拟南芥（在） ，胡萝卜（直流） ，黄水仙（ Np的） ，玉米（ Zm的） ，辣椒（钙） （OS） ，水稻或番茄（LE） ）.数据显示，转基因愈伤组织的中位数空矢量控制值（ EV ）的百分比表示，代表75个百分点。第二y轴（菱形）与类胡萝卜素的内容显示愈伤组织从每个群体中的百分比超过五倍的EV中位数 类胡萝卜素是一组重要的植物色素，是人饮食中唯一的维生素A的前体。某些类胡萝卜素中最重要的是β-胡萝卜素在人体中可转化为预成维生素A。维生素A缺乏症是部分发展中国家面临的严重问题，可能导致永久性失明和提高传染病的发病率。在亚洲，缺乏维生素A与贫困地区的可食用粮食有关，在粮食的可食用部分（胚乳）缺乏预成维生素A。在主食中主要提供预成维生素A，例如大米实施起来可能是简单而有效的补充计划，以为通过田间培育，可大量繁殖和自我维持。 黄金大米是用来形容转基因水稻的籽粒胚乳中产生类胡萝卜素，因为色泽发黄这一特征而得名。在这一开创性的工作，所有的类胡萝卜素最高水平达到1.6mg / g，在随后的实验中并没有被替代水稻品种超越。预成维生素A限量转入黄金大米中被媒体引用，是成功的解决维生素A缺乏的最大阻碍。 八氢番茄红素合成酶被认为是类胡萝卜素在一些野生型的组织合成的限速步骤，也被看作是一个主要的监管步骤（在线补充图1所示的途径图）。在油菜种子中只有CRTB （细菌的八氢番茄红素合成酶的编码基因）表达，使类胡萝卜素的含量大幅增加。在野生型水稻胚乳中，类胡萝卜素生物合成的第一个障碍是两个八氢番茄红素合成酶和胡萝卜素脱氢酶中所提供的水仙基因八氢番茄红素合成酶的crtI基因转入黄金大米中。不知道什么会影响将来黄金大米中类胡萝卜素的含量。由于没有茄红素的积累（ P.拜尔，弗莱堡大学，个人通信），它的饱和度下降使无色类胡萝卜素的番茄红素高效地进行编码crtI基因。我们假设，八氢番茄红素合成酶可能仍然是这个转基因组织中的限制因素。水仙八氢番茄红素合成酶蛋白目前被称黄金水稻胚乳与水仙的花瓣功能相当，这表明它是活跃的或不够替代八氢番茄红素合成酶功能，需要去克服它在转基因材料的限速步骤。 所有组织积累高水平的类胡萝卜素，类胡萝卜素封存有一个机制中，包括结晶，油沉积，膜增殖或蛋白脂质封存。普通水稻淀粉胚乳脂质含量低，显然没有类胡萝卜素。在其低水平下，这本身就可能是类胡萝卜素含量的上限，跟转基因黄金大米无关。黄金大米的另一个限制，可能是前体供应。我们选择不进行调查最初这些假设，并正式表明，在我们的工作过程中他们都没有被关注。 我们系统地测试八氢番茄红素合成酶cDNA尤其是富含类胡萝卜素的替代植物来源，目的是增加黄金大米中类胡萝卜素含量。在试图排列中显示适合用于水稻基因八氢番茄红素合成酶S ，每个玉米愈伤组织稳定转化成固有的类胡萝卜素（图1a）。两者的绝对量的标记结果在差异在性能上显示，明显的各种基因八氢番茄红素合成酶S在类胡萝卜素生产和高度着色的愈伤组织中的比例（图1b ）。这些措施都被判定为潜在的转基因疗效指标。最有效的玉米八氢番茄红素合成酶，具有高含量的类胡萝卜素，以及新的水稻八氢番茄红素合成酶 （ AJ715786 ，克隆这项工作），高比例的有色愈伤组织。胡萝卜PSY （ AB032797 ），番茄PSY1，柿子椒PSY1和拟南芥PSY中间的疗效，水仙PSY效果也很好。 基于为PSY的等级得到的愈伤组织的实验中，单独使用玉米，番茄和胡椒，每个用crtI基因PSY的cDN