Spectrum Living Image 40软件操作流程.pdfVIP

Spectrum Living Image 4.0 软件操作流程 本流程主要介绍 Spectrum的 Living Image 4.0软件的应用，包括参数介绍、生物发光、荧光 二维及三维成像的图像获取及数据分析 1、 控制面板参数介绍 整个图像的获取过程都通过该控制面板操作，其中曝光时间、bin值及光圈大小是最为关键 的参数，直接影响图像获取的质量。 曝光时间（exposure time） 曝光时间决定了信号强度，曝光时间越长，信号强度越高，实验时应根据实际情况设定适当 的曝光时间，初次实验若不知道合适曝光时间，可选择 Auto曝光，仪器会自动检测一个合 适的曝光时间以成像，当信号较弱时可适当增加曝光时间以获取较佳信号。注：生物发光成 像的曝光时间为分钟（min）级别，而荧光成像的曝光时间为秒（sec）级别，实验时应注意 参数设定。 关键参数，决定灵敏度 Bin值（Binning） Bin 值表述的是将多少像素作为感光单元，bin 值越大则表示应用更多的像素作为一个感光 单元，因此，bin值越大则灵敏度越高，而分辨率会有所牺牲，当信号强度较弱时可适当增 加 bin值以获取信号。 光圈大小（f/stop） 光圈大小决定了光的透过量，光圈越大，穿过光圈到达CCD的光越多，面板中的数字为F/stop 中的分母数字，因此，数字越小代表光圈孔径越大，透过的光越多，当信号较弱时可通过增 大光圈（减小数字）而增强信号探测能力。 f/1 f/8 Large Binning (16) Medium Binning (8) Small Binning (4) 视野范围（Filed of View） 视野范围用于调节观测的视野大小，共有 A/B/C/D 四档可选，分别代表不同大小的视野范 围，实验时根据一次观察小鼠个数选择合适的视野范围进行成像。 成像聚焦（Focus） 成像的聚焦包含自动聚焦和手动聚焦功能，在用小鼠进行成像时，一般默认成像对象的高度 为 1.5cm，仪器会自动完成聚焦，在用其他对象进行成像时（如大鼠），可调节 Subject height 参数，设定合适的聚焦高度，也可在 Focus下拉选项中选择 聚焦设定 FOV A: 4.0 cm FOV B: 6.5 cm FOV C: 12.5 cm FOV D: 21.5 cm 2、 生物发光二维成像的图像获取 勾选 Luminescent、Photograph及 overlay选项，设置好曝光时间（生物发光曝光时间为分钟 级别）、bin值、光圈大小及视野范围等参数（软件有默认参数，可按照默认参数成像，若效 果不佳，则再调整各参数，调整的次序按照曝光时间＞bin值＞光圈大小顺序调整），Emission Filter选项设置为 open，Photograph选项的参数一般情况无需调整，所有参数设定完毕后点 击 Acquire按钮即可开始成像。 成像完成后，在得到结果图的同时会弹出实验信息记录对话框（下图右框），可输入相关实 验信息以记录实验情况，一次可最多同时选择 5个选项进行记录，记录完成后，记录的相关 信息会反映在结果图中，点击结果图中的 info按钮即可看见。 3、 荧光二维成像的图像获取 荧光二维成像与生物发光二维成像的操作流程基本类似，只是多了一些参数的设定，另外， 对于需要扣除背景的成像，需应用到荧光光谱分离技术，该技术的操作流程将在第 4节中详 细说明，本节主要介绍获取单张荧光二维图片的操作流程。荧光二维成像可选择使用反射照 明或透射照明进行荧光激发，当信号在皮下等较浅部位时可选择反射照明成像，而当信号位 于肝脏等较深部位时可选择透射照明（Transillumination）进行成像。 对于反射照明成像具体步骤如下：勾选 Fluorescent、Photograph 及 overlay 选项，设置好曝 光时间（荧光曝光时间为秒级别）、bin值、光圈大小及视野范围等参数（软件有默认参数， 可按照默认参数成像，若效果不佳，则再调整各参数，调整的次序按照曝光时间＞bin值＞ 光圈大小顺序调整），根据标记所用探针的激发光及发射光波长，选择合适的激发光 （Excitation）及发射光（Emission）滤片，Photograph选项的参数一般情况无需调整，所有 参数设定完毕