仪器分析实验概述.docVIP

PAGE  PAGE 21 仪器分析试验讲义 （第二版） 授课人：李 蓉 王小刚 西北大学化工学院食品科学系 2004年6月编制 实验一 邻二氮杂菲分光光度法测定铁 一．实验目的 1．了解752型紫外可见分光光度计的构造和使用方法。 2．掌握邻二氮杂菲分光光度法测定铁的方法。 （1）吸收曲线的测绘； （2）标准曲线的测绘； （3）未知样中铁含量的测定； 二．原理 图1-1 分光光度计光学系统图 光源 2-进光狭缝 3，6-反射镜 4，7-透镜 5-棱镜 8-出光狭缝 9-比色皿 10-光电调节器 11-硒光电池 12-检流计 1．分光光度法及其测量的条件:分光光度法主要利用的是物质对光的选择性吸收，按照郎伯-比尔定律，在一定的线性范围内（即浓度范围内）找出吸光度A与物质含量之间的定量关系。主要受显色条件和测量吸光度条件的影响，其中显色条件主要与显色剂的用量、介质的酸度、显色温度、显色时间以及干扰离子的消除等有关；而测量吸光度的条件则与入射波长λ、吸光度范围以及参比溶液等有关。 2．邻二氮杂菲-亚铁配合物：在显色前，首先用盐酸羟胺把Fe3+离子还原为Fe2+离子，其反应式如下： 在pH=2-9的条件下，Fe2+离子与邻二氮杂菲生成极稳定的橘红色配合物，其反应式如下： 该配合物的lgK稳 = 21.3，摩尔吸光系数ε510 = 1.1×104。 测定时，溶液酸度控制在pH=5.0，以避免酸度过高导致反应速度过慢，酸度过低Fe2+离子水解，从而影响显色；此外，若溶液中存在着可与显色剂生成沉淀（Bi3+、Cd2+、Hg2+、Ag+、Zn2+）或有色配合物（Ca2+、Cu2+、Ni2+）的离子时，应注意它们的干扰作用。 三．752型紫外可见分光光度计的使用 1．打开电源开关，使仪器预热20分钟； 2．按“方式键”（MODE）将测试方式设置为吸光度方式； 3．按“波长设置”键（p，σ）设置想要的分析波长； 4．打开样品室盖，将盛有参比和被测溶液（约2.5 cm）的比色皿分别插入 比色槽中，盖上样品室盖； 5．将参比溶液推入光路中，按“100%T”键调整零ABS； 6．将被测溶液拉入到光路中，此时显示器上所显示的是被测样品的吸光度值。 四．试剂 10 μg/mL的铁标准溶液；10%的盐酸羟胺溶液；0.1%的邻二氮杂菲溶液；1 mol/L NaAc溶液。 五．实验内容 1．吸收曲线的测绘：准确移取10 μg/mL铁标准溶液5 mL于50 mL容量瓶中，加入10%盐酸羟胺溶液1 mL，摇匀，稍冷，加入1 mol/L溶液5 mL和0.1%邻二氮杂菲溶液3 mL，以蒸馏水稀释至刻度，在752型紫外可见分光光度计，用比色皿以蒸馏水为参比溶液，用不同的波长从570 nm开始到430 nm为止，每隔10或20 nm测定一次吸光度（其中从530-490 nm，每隔10 nm测一次）。然后以波长为横坐标，吸光度为纵坐标绘制出吸收曲线，从吸收曲线上确定该测定的适宜波长。 2．标准曲线的测绘：取50 mL容量瓶6只，分别移取10 μg/mL铁标准溶液2.0、4.0、6.0、8.0和10.0 mL于5只容量瓶中，另一容量瓶中不加铁标准溶液。然后各加1 mL 10% 盐酸羟胺，摇匀，经2 min后，再各加5 mL 1 mol/L NaAc溶液及3 mL 0.1%邻二氮杂菲，以蒸馏水稀释至刻度，摇匀。在分光光度计上，用比色皿在最大吸收波长（510 nm）处，测定各溶液的吸光度。以铁含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。 3．未知液中铁含量的测定：吸取5 mL未知液代替标准溶液，其他步骤均同上，测定吸光度。由未知液的吸光度在标准曲线上查出5 mL未知液中的铁含量，然后以每毫升未知液中含铁多少微克表示结果。 六．记录及分析结果 比色皿： 光源电压： （1）吸收曲线的测绘 波 长/（nm）吸光度A570550530520510500490470450430 （2）标准曲线的测绘与铁含量的测定 试液编号标准溶液的量/mL总铁含量/μg吸光度10022.02034.04046.06058.080610.0100未知液七．课堂提问 1．邻二氮杂菲分光光度法测定铁的原理、反应pH条件、用什麽控制酸度、加NH2OH-HCl的目的？ 2．为什麽绘制吸收曲线？为什