Hepes-NaOH,pH7.4;.PDFVIP

PriCells: 原代细胞培养后，碘克沙醇梯度溶液分析主要细胞器 试剂和器材： 1. OptiPrepTM（600g/L 的碘克沙醇）； 2. 匀浆介质： 0.25mmol/L 蔗糖溶液、 1mmol/L 乙二胺四乙酸、 20mmol/L Hepes-NaOH，pH7.4； 3. OptiPrepTM 稀释液：0.25mmol/L 蔗糖、6mmol/L 乙二胺四乙酸、120mmol/L Hepes-NaOH，pH7.4； 4. 碘克沙醇（500g/L）工作液（IWS）：5 体积 OptiPrepTM +1 体积 OptiPrepTM 稀释液； 5. 按要求向匀浆介质和 OptiPrepTM 稀释液中加入蛋白酶抑制剂； 6. 使用匀浆介质制备好的轻线粒体组分； 7. Dounce 匀浆器（宽松配制，Wheaton B 型）； 8. 两室梯度制备仪或 Gradient MasterTM； 9. 5ml 规格注射器（内径大约为 0.8mm），带金属套管针； 10. 超速离心机，配有吊桶式转子（离心管容量为 17ml）； 11. 梯度收集器，用来首先收集低密度或高密度的梯度液； 实验方法：