树突状细胞的分离纯化与鉴定.PDFVIP

树突状细胞的分离纯化与鉴定 自从 Stciman首次发现树突状细胞(dendritic cell ,DC) 以来, 人们对DC的认识随着它的 分离与纯化技术的改进而逐步深入, 认识的深入又进一步促进了 DC 分离与纯化技术的提 高。现已能够从大多数组织中得到高纯度的、各具特异性的 DC。DC 的纯化方法包括两大 类: (1) 物理方法: ①根据细胞的黏附性进行分离, 有黏附分离法、尼龙毛分离法、羰基碳分离法, 各种 淋巴细胞的黏附能力依次为巨噬细胞 DC = 抗体产生细胞 B细胞 T细胞; ②根据细胞的 大小比重进行分离, 包括聚蔗糖 2泛影葡胺( Ficoll2 Paque) 密度梯度离心、Percoll非连续性 / 连续性密度梯度离心、E花环沉淀分离; (2) 免疫分选: 包括淘洗法( Pan2 ning) 、流式细 胞术(fluid cytometry ,FCM) 、磁性细胞分离术 (MACS) 。以下就不同组织 DC的分离作一 综述。 1 从外周血直接分离 DC 首先分离外周血单个核细胞( PBMC) 。常用方法有: (1) Ficoll 不连续密度梯度离心, 将人外周抗凝血稀释置于 Ficoll2Paque 淋巴细胞分离液上 离心, 速度(170 g～1 000 g)和时间(20～45 min) 因各个实验室而异, 分离液与血浆之间的界 面层细胞即是 PBM