薄层色谱和柱层析综述.ppt

薄 层 色 谱 和 柱 层 析;色 谱 法;;色谱法的分类;3) 根据分离机理分类; 最常用的薄层色谱也属于液-固吸附色谱。同柱色谱不同的是吸附剂被涂布在玻璃板上，形成薄薄的平面涂层。干燥后在涂层的一端点样，竖直放入一个盛有少量展开剂的的有盖容器中。展开剂接触到吸附剂涂层，借毛细作用向上移动。与柱色谱过程相同，经过在吸附剂和展开剂之间的多次吸附-溶解作用，将混合物中各组分分离成孤立的样点，实现混合物的分离。 ;薄层板;薄层色谱法点样及展开过程;特 点 : 分离能力强，斑点集中； 灵敏度高； 展开时间短； 试样预处理简单； 上样量大； 仪器简单操作方便。;Rf值测量示意图;薄层固定相 按照固定相的种类，薄层板可分为正相薄层板（如硅胶薄层板、聚酰胺薄层板）、反相薄层板（如C18键合相薄层板）等。 硅胶薄层板是目前使用最广的薄层板，有硅胶G板、硅胶GF254板、硅胶H板和硅胶HF254板等规格。 高效薄层板（HPTLC，High Performance TLC）所使用的固定相较普通薄层板平均粒度小，颗粒分布范围窄，因此在相对短的展开距离中可以达到更好的分离效果。;薄层点样;以点样方式的不同可分为接触式点样和喷雾点样两种。 接触式点样：多采用定量毛细管、微量注射器手动点样，有的仪器也可进行自动接触式点样。 接触式点样应注意： 正确选择溶解样品的溶剂 原点直径一般以3mm为宜 防止点样毛细管损伤薄层表面 尽量避免多次点样 防止点样环形色谱效应;点样环形色谱效应： 在点样的同时，样品在原点呈环状展开，如果样品在溶剂中的溶解度很大，原点将变成空心环，称为“点样环形色谱效应”。它会对展开造成不良影响。应选择样品组分溶解度相对较小的溶剂以避免此现象的产生。;;展 开 选择大小适合的展开容器，将点有样品的薄层板放入容器内的展开剂中，浸入深度以展开剂液面距点样基线5mm为宜，密闭，展开。一般上行展开8-15cm，高效薄层板上行展开5-8cm。在溶剂前沿达到预定展距后，取出薄层板，晾干，待检测。 展开方式主要有上行展开、下行展开、双向展开、水平展开、环形展开等。目前多采用上行展开。; 边缘效??：薄层展开后，位于薄层板边缘的样品斑点比移值较处于中间的斑点大的现象。边缘效应会使斑点扩散变形，从而影响样品定性结果的判断。薄层扫描定量时，斑点的形状直接影响到扫描后的峰高和峰宽，从而影响定量结果的准确性。; 预饱和：可在加入展开剂后使展开容器密闭，放置15-30分钟，待溶剂蒸汽平衡后，迅速放入点有样品的薄层板，立即密闭，展开。必要时可放置适当大小的滤纸促使展开缸内蒸汽达到饱和。;常用展开剂 对展开剂的要求 对被测组分有良好的溶解性； 有良好的分离效果； 斑点圆整不拖尾； Rf值最好在0.3-0.5，组分较多最好在0.25-0.75； 展开剂不能和被测组分发生反应； 沸点适中，粘度较小。; 用单一溶剂为展开剂时，由于溶剂组分简单，分离重现性好，对于难分离的化合物经常要用二元、三元甚至多元溶剂组成的展开剂。在混合展开剂中占比例大的主要溶剂起溶解物质和基本分离的作用，比例较小的溶剂起调整改善分离物质的Rf值及对某些物质的选择作用。一般主要溶剂选用不易形成氢键的溶剂，或极性比分离物质低的溶剂，否则将使被分离物质的Rf值太大或甚至跟随溶剂前缘移动。 在展开剂中加入少量酸、碱可以使某些极性物质斑点集中，提高分离度，用粘度太大的溶剂时，需要加入一种溶剂以降低展开剂的粘度、加快展开速度。 例：环己烷－丙酮－二乙胺－水（10:5:2:5）这个系统中，水是极性大的溶剂，环己烷是极性小的溶剂，后者的加入可以降低分离物质的Rf值，丙酮起着混合整个系统及降低展开剂粘度的作用，少量二乙胺的加入控制了展开剂的pH值以使分离后的斑点不致拖尾，分离清晰。;显 色;碘蒸气在浅黄色背景上，很多有机化合物吸附碘，可逆地产生棕色到黄色斑点，不少化合物的检测灵敏度可达0.5~1μg。 10%硫酸乙醇液，喷雾后于105℃加热10~15min，日光或紫外光下观察。大多数有机物呈有色斑点，如红色、棕色和紫色等，在炭化以前，不同的化合物将出现一系列颜色的改变，被炭化的化合物常出现荧光。 高锰酸钾－硫酸液，结果为粉底本色上产生白色斑点。 25%高氯酸水液，喷雾后加热至150 ℃观察。 10％～20％五氯化锑的四氯化碳液，或三氯化锑的乙醇饱和溶液。喷雾后，在100～120 ℃加热，日光下和紫外光下观察，这也是有机化合物的通用试剂，和很多有机化合物产生不同的颜色。 还有很多专属性显色剂，种类繁多，如有需要可参阅有关书籍。;定性和定量分析 （一）定性 利用Rf值定性（或相对比移值Rr）