仪器分析实验内容(一)概述.doc

邻二氮菲分光光度法测定试样中的微量铁 一、实验目的 1．掌握邻二氮菲分光光度法测定微量铁的方法原理 2．熟悉绘制吸收曲线的方法，正确选择测定波长 3．学会制作标准曲线的方法 4．通过邻二氮菲分光光度法测定微量铁，掌握721型分光光度计的正确使用方法，并了解此仪器的主要构造。 二、实验原理 邻二氮菲（phen）和Fe2+在pH3~9的溶液中，生成一种稳定的橙红色络合物Fe(phen) EQ \S(2+,3) ，其lgK=21.3，ε508=1.1×104 L·mol-1·cm-1，铁含量在0.1~6μg·mL-1范围内遵守比尔定律。显色前需用盐酸羟胺或抗坏血酸将Fe3+全部还原为Fe2+，然后再加入邻二氮菲，并调节溶液酸度至适宜的显色酸度范围。有关反应如下： ==== ↑+ 2H2O + 4H+ + 2Cl- 用分光光度法测定物质的含量，一般采用标准曲线法，即配制一系列浓度的标准溶液，在实验条件下依次测量各标准溶液的吸光度A，以溶液的浓度C为横坐标，相应的吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线。在同样实验条件下，测定待测溶液的吸光度Ax，根据测得吸光度值Ax从标准曲线上查出相应的浓度值Cx，即可计算试样中被测物质的质量浓度。 三、仪器和试剂 1．仪器 721型分光光度计，1 cm比色皿。 2．试剂 （1）100 μg·mL-1铁标准储备溶液。 （2）100 g·L-1盐酸羟胺水溶液。用时现配。 （3）0.1% 邻二氮菲水溶液。避光保存，溶液颜色变暗时即不能使用。 （4）pH=5.0的乙酸-乙酸钠溶液。 四、实验步骤 1．显色标准溶液的配制 在序号为1~6的6只50 mL容量瓶中，用吸量管分别加入0，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0 mL铁标准使用液（含铁约100μg·mL-1），分别加入1.00 mL 100 g·L-1盐酸羟胺溶液，摇匀后放置2 min，再各加入5.0 mL乙酸-乙酸钠溶液，3.00 mL 0.1% 邻二氮菲溶液，以水稀释至刻度，摇匀。 2．吸收曲线的绘制 在分光光度计上，用1 cm吸收池，以试剂空白溶液（1号）为参比，在480~540 nm之间进行扫描，测定待测溶液（如5号）的吸光度A，得到以波长为横坐标，吸光度为纵坐标的吸收曲线，从而选择测定铁的最大吸收波长λmax。 3．标准曲线的测绘 以步骤1中试剂空白溶液（1号）为参比，用1 cm吸收池，在选定波长下测定2~6号各显色标准溶液的吸光度。以铁的浓度(μg.mL-1)为横坐标，相应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。 4．铁含量的测定 移取试样溶液（7号）1.5mL,按步骤1显色后，在相同条件下测量其吸光度Ax，由标准曲线上查出对应的Cx，再进一步计算试样中微量铁的质量浓度CFe。 五、数据记录与处理 1．以吸光度为纵坐标，波长为横坐标，绘制吸收曲线，找出最大吸收波长λmax，并计算其εmax。 2．以吸光度为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。然后，根据试样吸光度在标准曲线上查出相对应的浓度值，计算出试样中铁的含量（μg·mL-1 ）。 六、思考题 1．用邻二氮菲测定铁时，为什么要加入盐酸羟胺？ 2．吸收曲线与标准曲线有何区别？在实际应用中有何意义？ 3．测绘标准曲线和测定试液时，为什么要以试剂空白溶液为参比？ 紫外分光光度法测定水中总酚的含量 一、实验目的 1．掌握紫外分光光度法测定酚的原理和方法。 2．掌握应用紫外分光光度计进行定量分析的方法和基本操作。 二、实验原理 苯酚是工业废水中的一种有害物质，如果流入江河，会使水质受到污染，因此在检测饮用水的卫生质量时，需对水中酚含量进行测定。 苯具有环状共轭体系，由 π→π*跃迁在紫外吸收光区产生三个特征吸收带：强度较高的E1带，出现在180nm左右；中等强度的E2带，出现在204nm左右；强度较弱的B带，出现在255nm。有机溶剂、苯环上的取代基及其取代位置都可能对最大吸收峰的波长、强度和形状产生影响。具有苯环结构的化合物在紫外光区均有较强的特征吸收峰，在苯环上的部分取代基（助色团）使吸收增强，而苯酚在270nm处有特征吸收峰，在一定范围内其吸收强度与苯酚的含量成正比，符合Lambert-Beer定律，因此，可用紫外分光光度法直接测定水中总酚的含量。 三、仪器与试剂 UV2300型紫外可见分光光度计，石英比色皿（1cm）2 个，50mL容量瓶，移液管等。 苯酚标准溶液250 mg·L -1：准确称取0.0250g苯酚于250mL烧杯，加20mL去离子水溶解，移入100mL容量瓶，用去离子水定容至刻度，摇匀。 四、实验步骤 1．标准系列溶液的配制 取5只50mL容量瓶，分别加入2.00，4.00，6.00，8.00，10.00mL浓度为250 mg·L -1的苯酚标准溶液，用去