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microRNA联合单因子诱导iPS细胞的研究 闫秋月 张苏明＃ 华中科技大学同济医学院附属同济医院 内 容 目 录 研究背景 研究内容 研究结果 研究意义 研 究 背 景 脑血管疾病治疗现状 脑血管疾病的高致残率和高死亡率给社会和家庭带来了巨大的经济和精神负担。 目前，对于脑梗塞和脑出血的治疗除传统神经康复治疗之外，尚没有其它促进受损神经功能有效恢复或重建的根治性治疗方法。细胞移植治疗是最具潜能的一种治疗方法。 研 究 背 景 细胞治疗现状 细胞治疗现状 研 究 背 景 iPS细胞概述 induced pluripotent stem (iPS) cells：诱导多潜能干细胞，是一种能够自我复制更新，具有向三个胚层分化能力的类ES细胞。 通过过表达胚胎干细胞多能性基因，对终末体细胞进行重编程，使之逆向分化为类胚胎干细胞状态，即为iPS细胞。 研 究 背 景 iPS细胞概述 研 究 背 景 iPS细胞概述 研 究 背 景 iPS细胞概述 研 究 背 景 研究目标 优化iPS细胞诱导体系，降低致癌性。 立题思路 microRNA294可提高三因子（去掉c-Myc）的iPS细胞诱导效率。 microRNA302a在重编程过程中发挥重要作用。 神经干细胞本身可表达Sox2，c-Myc和Klf4基因。 研 究 内 容 研 究 内 容 研究流程图 Neural stem cells 研 究 内 容 本研究具体内容 iPS细胞的鉴定 神经干细胞的培养 逆转录病毒颗粒的制备 获得神经干细胞 研 究 结 果 原代培养的神经干细胞光镜下形态（100×）及Nestin染色（100×） 脂质转染法获得病毒颗粒 研 究 结 果 PLAT-E细胞转染前及转染后48h GFP表达（荧光显微镜，×100） iPS细胞的获得及鉴定 研 究 结 果 iPS细胞的基因表达水平鉴定 研 究 结 果 Real-time PCR检测iPS细胞多能性基因的表达 microRNA在细胞重编程的过程中发挥着重要的调节作用 miR294和miR302a可以取代c-Myc和 Klf4两个癌基因，在不降低诱导效率的前提下,减少癌基因的使用,降低致癌性 研 究 结 论