CENP-E蛋白动力结构域对纺锤体检查点机制的影响-第三军医大学学报.doc

PAGE  PAGE 13 CENP-E蛋白动力结构域与纺锤体检查点机制的关闭有关 刘子杰，翁亚光，施琼，蔡燕，刘斌，李素彦,张燕，阎琛 (重庆医科大学:医学检验系,临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室,重庆市重点实验室,重庆400016) 摘要: 目的 纺锤体检查点在染色体分离过程中扮演重要的角色,它监控着丝点与微管 的连接从而调控染色体的分离。CENP-E蛋白是一个纺锤体检查点重要蛋白，CENP-E蛋白动力基金项目：1 国家自然科学基金资助项目（No; Supported by the National Natural Science Foundation of China（No; 2 教育部博士点基金资助项目(No.20060631012) Doctoral program fund of Ministry of Education(No.20060631012) 作者简介：刘子杰,男，湖南省涟源县人，博士，主要从事染色体分离机制研究。 电话:(023 Email: redjacky502@ 通讯作者:翁亚光， 电话:(023  HYPERLINK mailto:Email.SjHu@ Email:yaguangweng@126.com 收稿日期： ；接受日期： 结构域能与纺锤体微管结合，因此CENP-E蛋白动力结构域有可能与纺锤体检查点机制关闭有关。本研究的目的在于克隆含CENP-E蛋白动力结构域的真核表达载体,并观察其对纺锤体检查点机制关闭的影响。方法 采用RT-PCR，分子克隆技术获得含CENP-E动力结构域的真核表达载体pEGFP-CENPE1(1-336位氨基酸), pEGFP-CENPET1(包括1-336和2078-2492位氨基酸)，通过流式细胞术，染色体核型分析观察CENP-E蛋白动力结构域对纺锤体检查点的影响。结果 成功构建出pEGFP-CENPE1、pEGFP-ET1融合质粒并在HEK293细胞中正确表达；流式细胞胞术和染色体核型分析结果表明：转染含CENP-E蛋白动力结构域的载体的细胞在用破坏纺锤体微管药物处理后不能保持纺锤体检查点机制,细胞提前进入分裂后期,染色体完成异常的分离；非整倍体细胞数目增多。结论 CENP-E通过动力结构域与纺锤体微管连接能导致纺锤体检查点机制关闭。 关键词: 纺锤体检查点;CENP-E;结构域;细胞周期 [中图号]R730.231 [文献标识码]A The motor domain of CENP-E is related with the inactivation of the spindle assemble checkpoint LIU zi-jie,WENG ya-guang, SI qiong ,CAI yan,LIU bin,LI su-yan, ZHANG yan ，YAN chen （the key laboratory of chongqing, the key laboratory of laboratory medical diagnostics, ministry of education. the faculty of laboratory medicine, chongqing medical university, chongqing 400016， china） Abstract: Objective Spindle assemble checkpoint plays a key role in the regulation of chromosomal separation through its supervision of the linkage between kinetochore and microtubule. CENP-E is an important protein for the spindle assemble checkpoint. The motor domain of the CENP-E protein may corelate with the inactivation of the spindle assemble checkpoint as it can bind to microtubule. The present study was initiated to construct the mammalian expression vector containing the motor domain of human CENP-E protein and to f