吴艳-激光共聚焦成像系统.ppt.ppt

吴艳分子影像与核医学研究中心401#1124;荧光显微镜;荧光显微镜;显微镜参数;7．荧光照明器：主机反射荧光系统可采用复眼照明技术，平均荧光视野亮度，便于量化分析； 8. 荧光光源：130W以上长寿命荧光光源, 光导管传输，长度1.5米，符合RoHS 和WEEE法令要求； 9. 高通透性荧光激发块：紫外， BP340-390, DM410，BA420-IF 蓝色，BP460-495, DM505，BA510-IF 绿色，BP530-550, DM570，BA575-IF； 10．荧光激发块转盘：编码型荧光激发块转盘，≥7孔位设计，便于今后扩展应用,无需工具即可更换滤色镜组,与软件连接后能够随图片保存荧光滤色镜组信息； 11．滤色镜：透射用日光平衡滤色片、绿色滤色片，荧光用减光片ND6/ND25； 12．DIC附件：40X、60X物镜配置微分干涉附件。 ; 基本原理;标本制作要求; 荧光显微镜的不足: 1.无法实现对荧光,透射光的同时采集,无法实现多重荧光的同时采集及共定位。 2.荧光散射光太强，造成实际分辨率的大大下降。 3.荧光漂白及对细胞组织的照射损伤。 4.无法对样品进行断层扫描,完成3D的工作。 5.只能在二维环境下观察。 6.样品不能太厚。;激光共聚焦扫描显微镜;共聚焦显微镜的类型;激光共聚焦扫描显微镜;上转换共聚焦扫描显微镜;仪器参数;仪器参数;仪器参数;仪器参数;基本原理;仪器特点;;;;3、点与面扫描技术 共聚焦显微镜：将样品分解成二维或三维空间上的无数点，用十分细小的激光束（点光源）逐点逐行扫瞄、成像，通过计算机软件组合，最后得到一个整体平面的或立体的像。4、图像信号及处理： 光电倍增管放大信号，计算机采集和处理光信号。;更灵敏： 共聚焦显微镜采用了光电倍增技术，可将很微弱的荧光信号放大。只要有信号就能被检测到。定位更精确： 不仅可以定位到细胞水平，还可以定位到亚细胞水平、和分子水平。这也是荧光标记的抗体被称为分子探针的原因。光漂白和荧光淬灭作用小： 由于利用光源光束点扫描，检测过程快，时间短，计算机精确控制激发光强度，光漂白和荧光??灭作用很小。; 石蜡切片，冰冻切片，涂片，印片、铺片，培养的粘附细胞，悬浮细胞，各种染色，非染色荧光标记的组织（包括活组织） ;共聚焦显微镜的应用; 1、高清晰成像;鼠成纤维细胞 单克隆anti–β-tubulin标记 ;涡虫纲扁虫肌动蛋白丝 鬼笔环肽;培养的人肝癌细胞吖叮橙染色; 2、半定量荧光强度分析;利用荧光与透射光同时扫描，观测相等面积内不同组间荧光标记蛋白表达的差异。; 4、分层扫描（切片扫描）;;连续分层扫描，可得到CT片类似的效果，对样品Z轴的结构进行分析。经计算机数据重组，可观测空间结构，空间定位，三维重组。; 5、多色荧光标记检测;高速双转盘活细胞共聚焦成像系统?;高速双转盘活细胞共聚焦成像系统?;速度更快 灵敏度更高 光毒性更低 实现活细胞3D~6D（XYZTWP）实时成像;可实现多种荧光染料标记的活细胞和固定细胞/组织的共聚焦成像。 能够对活细胞或活体组织实施低光漂白、低光毒性的连续扫描，有助于长时间维持细胞的活性,适于观察细胞周期、细胞骨架动态等长时间或极度光敏感过程。 能够在高分辨率和高灵敏度的情形下，观察快速的生物过程，如蛋白质的细胞膜输运和钙释放/钙闪过程。 能够完成三维、多荧光通道、多位点、长时程平行检测，适于复杂实验的多维图像采集【空间三维（xyz）、时间（t）、波长（w）、位置（p）】。 ;常用荧光探针介绍;细胞活性探针;细胞器探针;细胞骨架探针;核酸探针