微生物遗传变异与育种——工业微生物菌种的筛选汇编.pptxVIP

微生物遗传变异与育种 ——工业微生物菌种的筛选 一、前言 理想工业发酵菌种具有的特征： 1.纯种培养物； 2.遗传性状稳定； 3.生长速度快； 4.能利用廉价、来源广、成分简单的培养基； 5.能忍耐不良环境因素如温度、pH、离子强度、剪切力等； 6.快速生产目的产物，不产或少产毒性物质或副产物； 二、微生物菌种获得的途径 微生物的自然分布 土壤 空气 水 动植物体 各种极端环境 三、工业微生物的筛选 （一）微生物样品的采集 根据筛选的目的、微生物的分布情况、菌种的主要特征及其生态环境等因素，确定具体的时间、环境和目标物。 土壤采样 (1)采样对象—土壤 细菌和放线菌 一般园田土和耕作过的沼泽土 酵母和霉菌 富含碳水化合物的土壤和沼泽地中,如一些野果生长区 和果园内 采样的对象也可以是植物、腐败物品、某些水域等。 土壤采样 (2)采样方式 选点—在选好适当地点，用小铲子除去5cm表土 取土—取离地面5-15cm处的土约10g，盛入清洁的牛皮纸袋或塑料袋中扎好。 标记—记录采样时间、地点、环境条件等， 分离—将样品逐步分批寄回，及时分离。 土壤采样 影响因素 （1）土层的纵剖面： 最好的土层是5~25cm （2）土壤的pH： 偏碱土壤（pH 7.0~7.5），细菌、放线菌； 偏酸土壤（pH 7.0以下），霉菌、酵母菌； （3）土壤有机质含量和通气状况 （4）表面的植被 （5）地理条件 （6）季节条件 （二）富集培养 定义：一类使混合微生物群体中某特定微生物比例激增的培养方法。 目的：提高分离效率 控制因素：碳源、氮源、pH、温度、需氧量 控制培养基的营养成分 控制培养条件 添加抑制剂 1.控制培养基的营养成分 营养成分：碳源、氮源、无机盐类、生长因子等。 成分 用量 K2 HPO4 1g MgSO4?7H 2O 0.2g FeSO4?7H 2O 0.05g CaCl2 0.02g 微量元素溶液 0.1ml 蒸馏水 1L 表1:基础培养及成分 1.控制培养基的营养成分 控制增值培养基中营养成分,特别适合分离水解酶类(纤维素酶、淀粉酶类等)的生产菌，可在富集培养基中以相应底物作为唯一碳源，加入含菌样品，并给目的微生物以最佳的培养条件培养，能利用该底物的菌类得以繁殖，而其他微生物则因得不到碳源而无法生长。 但是许多的碳源、氮源可被多种多种微生物利用，不适于用作控制条件。 2.控制培养条件 （1）pH：一般通过添加磷酸盐缓冲液体系、碳酸钙，必要时加酸、碱方式进行调节； （2）培养温度和热处理：耐高温菌株，50~60℃温度培养；如细菌芽孢； （3）通风：一般筛选的微生物都是好氧菌，有时也分离厌氧菌，对于严格厌氧菌，除了配置特殊的培养基外，还需要厌氧培养箱、厌氧罐等设备。 3.添加抑制剂 被分离的微生物 添加物质及其质量浓度/(mg?mL-1) 被抑制的微生物 放线菌 放线菌酮（50），抑霉菌素（50），环己亚胺（50），匹马霉素（50），丙酸钠（4） 霉菌 环己亚胺+多粘菌素+枯草菌素，多粘菌素B（50）+青霉素（1） 细菌 放线菌酮（50~500），制霉菌素（100），曲骨霉菌素（500） 霉菌、酵母菌 原虫霉素（5） 原生动物 革兰氏阳性菌 多粘菌素B（5） 革兰氏阴性菌 革兰氏阴性菌 青霉素（1），月桂酸钠（2） 革兰氏阳性菌 酵母菌 氯霉素（100），青霉素（20）+链霉素（40），玫瑰红（50）+放线菌酮（10） 细菌 放线菌酮 霉菌 霉菌 氯霉素（100），青霉素（20）+链霉素（40），玫瑰红（35~67） 细菌 细菌、酵母菌 （三）分离纯化 为了获得某一特定的微生物菌种，必须进行微生物的分离纯化，把最需要的菌株直接从样品中分离出来； （1）常规的分离方法 获得的菌落均匀，获得纯种的概率大，特别适合 分离具有蔓延性的微生物 操作简单，方便快捷 稀释涂布法 划线分离法 将待测样品适当稀释，使其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释液接种到培养基上，经过繁殖每个单细菌长成肉眼可见的菌落，即一个菌落代表样品中的一个单细胞。 根据菌落数，稀释倍数，接种量可推算出原样品中的含菌数。 稀释涂布分离法 一般用菌落形成单位（colony forming units， CFU）来表示 原样品中的细胞数。 划线分离法 b.连续划线分离法 a.分区划线分离法 2017-4-13 18 （2）平皿反应快速检出法 菌种分离筛选流程 微生物遗传变异与育种 ——微生物遗传学 现代发酵技术 主要内容 遗传变异的物质基础 微生物的染色体分子结构 微生物基因组 染色体外遗传成分 一、遗