【实验】生物化学 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质分子量.pptVIP

【实验】生物化学 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质分子量.ppt

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SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质分子量;二、实验目的;二、实验原理;电泳的基本原理;TEMED:四甲基乙二胺 AP:过硫酸铵 Acr:丙烯酰胺;Acr:丙烯酰胺 Bis:双丙烯酰胺;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定不同分子量蛋白质;十二烷基硫酸钠;SDS的作用;肌浆球蛋白;浓缩、分离胶的双重效应;三、主要实验器材;电泳装置;槽内固定架 ;加样器/枪(pipet)\枪头;不同量程的加样器;不同型号的加样头;;多道加样器;96孔板;多道加样器的功用;加 样 器 的 握 法;选择恰当量程的加样器;;确定、调节量程;装配枪头;吸取溶液(样品);;多道加样器取液;放置方式;四、操作步骤; 在平整的桌面上放下玻璃与夹子,使玻璃和夹子的底面完全对齐,向外扳动塑料卡口,关紧夹子。 ; 玻璃夹放在制胶架上,薄玻璃朝向自己。按弹簧夹,将玻璃夹卡入制胶架。在玻璃的间隙内分别灌制分离胶和浓缩胶,放上梳子,待胶凝固。 ;2. 分离胶的制备和灌注;3. 浓缩胶的制备和灌注;加梳子——一次平稳插入,梳口无气泡,梳底水平;4. 蛋白质样品的处理;5. 电泳;将底座的开关打开,并向外拨动透明的架子,使中间空隙增大,放入电极架。 ;关上底座开关 ;加入缓冲液(0.1%SDS,0.3%Tris,1.5%Gly),取出梳子,准备点样。;点样:向样品槽中加入 20-30μl样品 ;电泳:80V,15-20min(浓缩胶);100V(分离胶)至指示剂距凝胶底边1cm。;6. 染色、脱色;7. 照相、分析结果;兔磷酸化酶B(97400) 牛血清白蛋白(66200) 兔肌动蛋白(43000) 牛碳酸酐酶(31000) 胰蛋白酶抑制剂(20100) 鸡蛋清溶菌酶(14400);8. 思考题

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