EDC？NHS交联原理资料.pdf

第35卷第12期 2007年12月 华南理工大学学报(自然科学版) Joumal of South China UniVersity of Technology (Natural Science Edition) V01．35 No．12 December 2007 文章编号：1000—565x(2007)12—0066，05 EDC／NHS交联对胶原物理化学性能的影响冰 王迎军 杨春蓉 汪凌云 (华南理工大学材料科学与工程学院，广东广州510640) 摘要：为了提高胶原的物理化学性能，采用1一乙基．3：(3．二甲基氨丙基)．碳化二亚胺 (EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)交联剂对胶原进行交联，考察了不同交联剂浓度对胶 原物理化学性能的影响，并通过红外、差示扫描量热分析(DSC)、吸水率、膨胀动力学、抗 酶解性能、扫描电镜(sEM)等技术手段对胶原交联前后的性能进行表征．研究结果表明， 胶原经EDc／NHs交联后，热稳定性、形态稳定性增强，抵抗酶解的能力显著增加，胶原的 显微结构由交联前的无序状态变为紧密有序的结构．说明EDc／NHs交联可有效改善胶 原的物理化学性能． 关键词：胶原；交联；物理化学性能；1一乙基一3一(3一二甲基氨丙基)．碳化二亚胺；N．羟基 琥珀酰亚胺 中图分类号：0636．1；TQ314．4 文献标识码：A 胶原具有天然的低毒性、低抗原性、低免疫性、 可引导细胞再生以及与人体相容性好的优点，被广 泛应用于生物医学材料和临床医疗领域¨之J．但未 经交联处理的胶原支架往往具有降解速率过快、易 发生收缩形变以及机械性能不足等缺点，无法满足 组织工程支架的要求．目前，胶原支架稳定化处理的 方法主要是通过物理或化学的方法对支架进行交 联．其中，物理方法有真空干热交联、紫外(uV)和y 射线交联等，这些方法的优点是不引入有毒化学物 质，能保持胶原良好的生物相容性，但单独采用物理 交联往往不能获得均一的、理想的交联强度，因此化 学交联方法得到更为广泛的应用． 常见的化学交联剂有醛类(甲醛、戊二醛等)、 碳化二亚胺类、双环氧类物质以及氰异酸盐等。3。。． 其中，戊二醛是一类广泛应用于胶原基生物材料的 交联剂，能降低胶原支架的抗原性，但是戊二醛交联 剂存在降低胶原支架生物相容性和易导致胶原支架 收稿日期：2007．05—25 s基金项目：国家“973”重大基础研究项目(20Q5cB623902)； 广东省自然科学基金团队项目(4205786) 作者简介：王迎军(1954．)，女，教授，博士生导师，主要从 事生物医用材料和组织工程材料研究．E—mail：imwangyj@． scllt．edl】．Pn 钙化等潜在的危险．研究表明，即使戊二醛残留质量 浓度低至3．0m∥L时仍有毒性，其未发生反应的官 能团或胶原在酶的作用下发生降解时所释放的这些 官能团均可能引起细胞毒性反应。引．利用碳化二亚 胺，特别是1一乙基一3一(3一二甲氨基丙基)碳化二亚胺 (EDc)交联胶原生物医学材料，要优于醛类交联 剂．碳化二亚胺只是帮助胶原分子的羧基和氨基之 间形成酰胺键，而本身并没有成为实际交联的一部 分，碳化二亚胺首先是和羧基偶合形成一个O一异酰 基脲结构，这一活化中问物受到一N心基团进攻形 成酰胺交联，而活化中间物可以消除并被清洗掉． EDC交联剂具有无毒、生物相容性良好的特点，并且 EDC交联的胶原基支架表现出更为优异的细胞相 容性，该类交联剂得到各国研究者的广泛关注旧。． 本实验选用无毒、生物相容性良好的EDc／NHs(N．羟 基琥珀酰亚胺)作为胶原的交联剂，并对交联前后胶 原的物理化学性质及显微结构特征进行比较研究． 1 实验 1．1 主要材料 I型牛胶原溶液，pH=4．2，浓度为5．8％，由广 州创尔公司提供．1一乙基一3一(3．二甲基氨丙基)碳二 亚胺(C。H，。N，·HCl)和N一羟基琥珀酰亚胺 万方数据 第12期 王迎军等：EDc／NHs交联对胶原物理化学性能的影响 67 (C。H，N0，)分别由上海吉尔生化公司和上海伯奥生 物科技有限公司提供．以2一(N一吗啡林)乙撑磺酸 (MES，C。H，，N0。S)为缓冲剂，由上海源聚生物科技 有限公司提供．L一羟脯氨酸由上海普博欣公司提供． 1．2 胶原交联 将胶原溶液置于低温冰箱(VxE380型，法国 Jouran公司)中，在一80℃下冷冻12h后，转入冷冻干 燥机(ALPHA2．4型，德国c¨st公司)中，在真空状态 下冷冻干燥24 h，直至完全脱水，得到胶原网络基质． 再将此干燥胶原基质浸入不同浓度的EDc溶液 中，将NHS按n眦：nⅧ为4：l的量加入，以MES为缓 冲剂调pH值至5．5．4℃下放置24 h，再用o．1 moL／L 的Na：HP0。溶液浸泡1 h，经去离子水