CSFV和PRRSV二联RT-PCR检测方法的建立.PDFVIP

吉林农业大学学报 2011, 33( 1) : 64~ 68 http : / / xuebao. jlau. edu. cn Journal of Jilin Agricultural University Email : jlndxb@ vip . sina. com CSFV 和 PRRSV 二联 RT- PCR 检测方法的 建立 王 开, 裴志花, 李 菲 吉林农业大学动物科学技术学院, 长春 130118 摘 要: 参照 GenBank 中猪瘟病毒( CSFV) 和猪繁殖与呼吸 障碍综合 征病毒( PRRSV) 基因保守序 列, 设 计 2 对 特异引物, 通过对最佳反应条件的优化, 建立了 CSFV 和 PRRSV 的二 联 RT - PCR 检测 方法, 该方法 可同时 扩 增得 到 2 条与试验设计相符的 443 bp( CSFV) 和 246 bp( PRRSV) 特 异性条带。 应用该 二联 RT - PCR 方法检 测 猪细小病毒( PPV) 、猪伪狂犬病毒( PRV) 、牛病毒性腹泻病毒( BVDV) 结果均为 阴性, 证明该方法 有良好的 特异 性。将已知阳 性病毒 PCR 模板最高稀释倍数作为 PCR 的敏感度, 结果表明该 二联 RT - PCR 体 系扩增的 敏感 度为 10- 3, 可对 CSFV 和 PRRSV 单个或混合感染的临床样品进行快速鉴别诊断。 关键词: 猪瘟病毒; 猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒; 二联 RT - PCR 中图分类号: S85265 文献标识码: A 文章编号: 10005684( 2011) 01006405 Establishment of Double RT- PCR for Detection of Classical Swine Fever and Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus WANG Kai, PEI Zhihua, LI Fei College of Animal Science and Technology , Jilin Agricultural University , Changchun 130118, China Abstract: According to the gene sequences in GenBank of swine fever virus ( CSFV) and porcine repro ductive and respiratory syndrome virus( PRRSV) , two pairs of specific primers were designed for amplify ing the two specific fragments of CSFV and PRRSV. After optimization of annealing temperature and primers concentrations, a double RT- PCR was established for simultaneous detection of the two viruses, and two specific bands of CSFV 443 bp and PRRSV 246 bp were detected. Porcine parvovirus ( PPV) , porcine pseudorabies virus ( PRV) and bovine viral diarrhea virus ( BVDV) were detected by the double RT- PCR, and the results were all negative, showing that this method has good specificity. The maxi mum dilution