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猪心脏瓣膜成肌纤维细胞的分离、鉴定与培养 刘凤丹，胡伟林，陈正平，李永胜(华中科技大学同济医学院附属同济医院急诊科，湖北省武汉市 430000) 引用本文：刘凤丹，胡伟林，陈正平，李永胜. 猪心脏瓣膜成肌纤维细胞的分离、鉴定与培养[J].中国组织工程研究，2016，20(51):7684-7689. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.51.013 ORCID: 0000-0003-3083-6477(刘凤丹) 文章快速阅读： 文题释义： 肌成纤维细胞：瓣膜间质细胞位于瓣膜内皮下，是心脏瓣膜最多的细胞类型，和瓣膜内皮细胞一起是构成心脏瓣膜内稳态最重要的细胞。成肌纤维细胞是一种能够表达平滑肌α-平滑肌肌动蛋白和Ⅰ型胶原纤维、并具有一定分化潜能的重要的瓣膜间质细胞，不仅在瓣膜的结构中起着支架作用，尤其在瓣膜的正常生理以及病理应答过程中发挥着重要的调控作用。 钙化性心脏瓣膜病：多指老年退行性心脏瓣膜病。随着年龄增长，心脏瓣膜结缔组织发生退行性变、纤维化、钙化等，而导致的瓣膜或支架的功能异常。目前，钙化性主动脉瓣疾病已成为主动脉瓣狭窄及瓣膜置换的首要病因，预计其发病率进一步提高，但其发病机制尚不明确。 摘要 背景：瓣膜间质细胞是心脏瓣膜中的主要细胞成分，成肌纤维细胞是一种能够表达平滑肌α-平滑肌肌动蛋白和Ⅰ型胶原纤维，并具有一定分化潜能的重要的瓣膜间质细胞，不仅在瓣膜的结构中起着支架作用，尤其在瓣膜的正常生理以及病理应答过程中发挥着重要的调控作用。 目的：建立一套可靠的心脏瓣膜成肌纤维细胞分离、原代培养与鉴定的方法，为心瓣膜钙化等疾病的进一步研究奠定基础。 方法：①从猪心中获取主动脉辨，分别用酶联和消化法、普通酶消化法以及组织块种植法提取猪主动脉瓣瓣膜成肌纤维细胞，进行原代培养；②显微镜观察3种方法培养出的成肌纤维细胞的活性和形态；③用光学显微镜和免疫细胞化学方法鉴定细胞。 结果与结论：①3种方法中，利用胰酶和胶原酶Ⅱ联合消化，然后迅速终止消化的方法获得成肌纤维细胞的活性更高，状态更好，纯度更高；②在荧光显微镜下，观察到获得的主动脉瓣成肌纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白染色阳性，抗血管性血友病因子染色阴性，提示培养的细胞为成肌纤维细胞。 关键词： 组织构建；组织工程；瓣膜钙化；瓣膜间质细胞；成年猪；成肌纤维细胞；平滑肌细胞；细胞培养；分离；纯化；细胞鉴定；国家自然科学基金 主题词： 细胞培养技术；细胞分离；肌细胞，平滑肌；组织工程 基金资助： 国家自然科学基金 Isolation, identification and culture of porcine heart valve myofibroblasts Liu Feng-dan, Hu Wei-lin, Chen Zheng-ping, Li Yong-sheng (Department of Emergency, Tongji Hospital of Tongji Medical College of Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430000, Hubei Province, China) Abstract BACKGROUND: Valvular interstitial cells are the main components of the heart valves. Myofibroblasts, as a kind of valvular interstitial cells, can express alpha-smooth muscle actin and type I collagen fiber, and hold differentiation potential. These cells cannot only play a support role in the valve structure, but also play a regulatory role in the process of the valve normal physiological and pathological responses. OBJECTIVE: To obtain a reliable method of separation, primary culture and identification of myofibroblasts laying a foundation for further study on the cardiac valvular calc