草鱼PGC-1α基因部分序列克隆及组织表达特征-水产学报.doc

草鱼PGC-1α基因的表达及饲喂HUFA对其影响的研究 吉红12* ，刘品1 李杰1 淡荣1 (西北农林科技大学动物科技学院陕西 杨凌 712100) 摘要：获得了草鱼过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助活化因子1α ( PGC-1α）部分cDNA序列GenBank注册号为HM015283，并进行了序列同源性分析；采用实时定量反转录聚合酶链式反应 qRT-PCR)方法，检测了PGC-1α基因在草鱼不同组织的表达状况研究了投喂HUFA）对草鱼肝胰脏PGC-1α基因表达的影响。结果显示所获得的草鱼PGC-1α部分cDNA序列长度为61bp，与的同源性为75%～97%基因在草鱼肝胰脏、肾脏、肌肉、心脏、鳃等个组织中均有表达其中在肾脏和心脏中表达丰度最高在精巢和脾脏中表达丰度最低草鱼HUFA饲料后天PGC-1α极显著升高又迅速下降。首次克隆得到草鱼PGC-1α基因部分cDNA序列关键词：草鱼；PGC-1α；基因； 中图分类号： 文献标识码：A 过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助活化因子1αperoxisome proliferater activated receptor γ coactivator-1, PGC-1α）属于PGC-1转录辅助活化因子家族，可辅助激活过氧化物酶体增殖物激活受体γperoxisome proliferater activated receptor γ, PPARγ）、过氧化物酶体增殖物激活受体αperoxisome proliferater activated receptor α, PPARα）、甲状腺受体（hyroid receptor, TR）、糖皮质激素受体（lucocorticoid receptor, GR）、雌激素受体α（strogen receptor α, ER α）、视黄醇X受体（etinoid X receptor, RXR）等核受体基因的表达[1]，参与适应性产热、葡萄糖摄取、肝脏糖异生、肝脏脂肪酸β氧化、脂肪细胞分化、肌肉类型转换等多种代谢过程。由于PGC-1α 参与调控线粒体的生成[2]，因此被认为是一种线粒体功能基因。 对人、小鼠和猪等陆生动物的PGC-1α基因已有较多研究，Yoon等[3]证明PGC-1α通过胰岛素诱导的cAMP体系在肝脏糖异生作用中发挥关键作用。马仕坤等4]利用细菌内同源重组的方法成功构建了编码小鼠PGC-1α基因的重组腺病病毒载体，并观察了其蛋白表达。水产动物方面，已克隆得到斑马鱼（Danio rerio）、金鱼（Carassius auratus）、红鳍东水鲀（Takifugu rubripes）、南极岩斑鳕（Chionodraco rastrospinosus）等鱼类PGC-1α基因的部分序列。LeMoine等[5]在金鱼上探究了温度、饥饿和油脂水平对PGC-1家族基因表达的影响。 高不饱和脂肪酸（ighly unsaturated fatty acids, HUFA）对鱼类脂质代谢有较大的调控作用。Ji[6] 和Om[7]发现在日粮中添加二十二碳六烯酸（ocosahexaenoic acid, DHA）可抑制黑鲷脂质合成并促进其脂质利用。吉红等[8]证实HUFA能够抑制草鱼脂质合成及其转运的能力，并可降低其肝胰脏及腹腔脂肪的沉积。HUFA作为转录因子的配体可调控脂质代谢相关基因的表达，如抑制乙酰辅酶A羧化酶(cetyl-CoA carboxylase, ACC）、脂肪酸合成酶fatty acid synthase, FAS）等脂肪酸合成酶系基因的表达，促进肉碱棕榈酰转移酶Ⅰ(arnitine palmitoyltransferase, CPTⅠ)、羟甲基戊二酰辅酶A（ydroxymethylglutaryl coenzyme A, HMG-CoA）等脂肪酸氧化酶系基因的表达[9]。而探讨PGC-1α与HUFA关系的研究仅见Flachs等[10]在小鼠上的报道。PGC-1α的部分cDNA序列，研究其在草鱼不同组织中的表达状况，并评估HUFA对草鱼肝胰脏PGC-1α基因表达的影响，以期为进一步探讨PGC-1α的功能、作用机理以及与草鱼脂质蓄积的关系的研究提供参考资料和理论依据。 1 材料与方法 1.1 试验鱼，饲料，饲养管理与取样 用于PGC-1α基因克隆和组织表达的草鱼500~800g）购自陕西杨凌康乐路水产品市场，试验鱼购回后立即解剖取其肝胰脏、脑、心、肌肉、肠、脂肪组织等个组织，液氮浇冻后-80℃保存备用。 表　配方、营养组成Tab. 1 Formulation, proximate composition and major fatty acid composition of the experimental diets 饲料配方（g/