发酵制药巩健子学习情境4教案.docVIP

子学习情境4 青霉素发酵 任务一 青霉素的结构和理化性质 β-内酰胺类抗生素特性和作用机制 结构特性 都含有一个四元的内酰氨环，并通过N与相邻的碳原子和另外一个杂环相稠合。 物理性质 白色或黄色无定型或结晶性固体。熔点不明显，具有旋光，酸性形式易溶于有机溶剂，盐易溶于极性溶剂，特别是水。 化学性质 化学性质活泼，由于稠环的作用，青霉素的内酰胺环很易开环，头孢菌素相对稳定。 作用机制 通过抑制肽聚糖转肽酶及D-丙氨酸羧肽酶的活性抑制肽聚糖的合成，从而干扰细胞壁的合成。 二 发展概况 1929 Fleming 首先发现青霉素可抑制葡球菌的生长，但并未获得足够重视 Florey Chain青霉菌发酵液中提取出了青霉素 1945 意大利 Brotzu 发现头孢菌素C 1958后 人工合成半合成青霉素、头孢菌素 陆续发现头霉素、克拉维酸、硫霉素、单环β-内酰胺 三 常用的β-内酰胺类抗生素 （一）青霉素： 苄青霉素、青霉素V、氨苄西林、替卡西林、甲氧西林、氯唑西林 头孢菌素 头孢菌素C、头霉素C、头孢力行、头孢克洛、头孢唑啉、头孢西丁、头孢他啶 新型β-内酰胺 四、天然存在的青霉素 青霉素是一族化合物的总称。 分子式： R为侧链，根据R基不同 青霉素G C6H5CH2- 青霉素X HOC6H4CH2- 青霉素F CH3CH2CH=CHCH2- 青霉素K CH3(CH2)6- 双氢青霉素F CH3(CH2)4- 青霉素V C6H5OCH2- 五、青霉素的理化性质 （一）稳定性 干燥纯净的青霉素盐很稳定，有效期都在三年以上，并且对热稳定，如结晶青霉素钾盐在150OC加热1.5小时效价不降低。 青霉素水溶液PH=5-7较稳定。最稳定的PH为6-6.5。 溶解度 青霉素在水中溶解度小，易溶于有机溶剂 青霉素盐易溶于水、甲醇 降解反应 青霉素遇酸、碱、加热易开环，倒是抗菌活性丧失。 详见课本 紫外吸收光谱 在252nm 257nm 264nm具有弱的吸收峰 过敏反应 任务二 发酵法工艺过程 现代抗生素生产绝大多数采用发酵法生产，虽然种类繁多，但其基本过程大致相同。 菌种――孢子制备――种子制备――发酵――发酵液的预处理及过滤――提取及精制――成品检验――成品包装――出厂检验。 一般说，从孢子制备到发酵属于“生物合成”范围 　　　　从预处理到提取精制属于化工范围 一 生产菌种 菌种是发酵生产的基础，必须产量高、性能稳定、容易培养。为防止菌种衰退，要合理保藏。一般保存在沙土管或冷冻于干燥管中。一般使用期为１－２年，不断纯化淘汰变异菌种。有条件的可以菌种选育，不断提高产量。 孢子制备 孢子制备是发酵工序的开端，孢子的质量、数量对以后菌丝体的生长繁殖有很大的影响。不同菌种的孢子制备工艺是不同的。 （一）.放线菌类 培养基：人工合成固体培养基，C源N源不要太丰富。以利于产生大量孢子 温度：大多28 土 1CO 部分菌种30 CO或者37 时间：（因菌种不同而异）一般4-7天 保存：2-4 CO冰箱保存一周左右 放线菌发酵生产的工艺过程如下： 采用哪一代的斜面孢子接入液体培养，视菌种特性而定。采用母斜面孢子接人液体培养基有利于防止菌种变异，采用子斜面孢子接入液体培养基可节约菌种用量。菌种进入种子罐有两种方法。一种为孢子进罐法，即将斜面孢子制成孢子悬浮液直接接人种子罐。此方法可减少批与批之间的差异，具有操作方便、工艺过程简单、便于控制孢子质量筹优点，孢子进罐法已成为发酵生产的一个方向。另一种方法为摇瓶菌丝进罐法，适用于某些生长发育缓慢的放线菌，此方法的优点是可以缩短种子在种子罐内的培养时间。 （二）.霉菌类 培养基：天然培养基（大米、小米、麦麸） 工艺过程：沙土管斜面亲米生产米种子罐 首先将保存于沙土管中或冷冻管中的菌种孢子接种在斜面上，恒温培养，孢子成熟后制作成孢子悬浮液然后接种到大米或小米等培养基上，恒温成熟后称为“亲米”，由亲米再转至大米或小米培养基上，培养成熟后称为“生产米”，用生产米介入种子罐内，培养温度一般为25-28度，培养时间一般为4-14天。 （三）.细菌类 培养温度：37CO 少数为28 CO 培养时间：多数1-2天 有的芽孢需要5-6天，甚至十多天 （四）影响孢子质量的因素及其控制 1、原材料质量的影响 多数抗生素产生菌对原材料敏感。 如：四环素斜面孢子与小麦麸皮质量关系密切，小麦的产地、品种、加工方法、成份用量对孢子质量均有影响。青霉素的大米孢子，由于大米产地、颗粒大小、均匀程度不同 如：琼脂的牌号不同对孢子的质量也有影响。原因是不同的琼脂含有不同的无机离子。 如：水质。污染，硬度大。人工调节 2、.培养条件的影响 1.温度： 如：链霉素（灰色链霉菌