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流式细胞仪; 流式细胞仪就是进行流式细 胞分析的仪器，它集电子技术、 计算机技术、激光技术、流体理 论于一体，是一种非常先进的检 测仪器。;流式细胞仪的特点;流式细胞仪的原理 流式细胞仪的应用 流式细胞仪的数据处理;流式细胞仪的工作原理;流式细胞术（Flow Cytometry, 简称FCM,又名FACS）是一种可以快速、准确、客观，并且同时检测单个微粒（通常是细胞）的多项特性的技术，同时可以对特定群体加以分选 研究对象为生物颗粒，如各种细胞、染色体、微生物、及人工合成微球等 研究的微粒特性包括多种物理及生物学特征，并加以定量;流式细胞仪仪器结构;Injector Tip; 细胞被戴上特殊的标记。所用的标记细 胞的探针是能够同待分选细胞表面特征性 蛋白(抗原)结合的抗体，而这种抗体又能 够同某种荧光染料结合。被结合的细胞带 上了荧光标记。当稀释的细胞进入超声波 振荡器时，极稀的细胞悬浮液形成很小的 液滴，一个液滴中只含有一个细胞。液滴 一旦形成并通过激光束时，激光束激发结 合在细胞表面抗体分子。;荧光染料及其发射波长;抗体的选择;实验对照的设计;实验标本的处理;流式细胞仪的样品要求;流式细胞仪的光学系统;Forward Angle Light Scatter;90 Degree Light Scatter;Dichroic Filter/Mirror;Laser;流式细胞仪的光学系统; 流式细胞仪通常以激光作为发光源。经过 聚焦整形后的光束，垂直照射在样品流上， 被荧光染色的细胞在激光束的照射下，产生 散射光和激发荧光。这两种信号同时被前向 光电二极管和90°方向的光电倍增管接收。 光散射信号在前向小角度进行检测，这种信 号基本上反映了细胞体积的大小；荧光信号 的接受方向与激光束垂直，经过一系列双色 性反射镜和带通滤光片的分离，形成多个不 同波长的荧光信号。;1 流式细胞仪的散射光信号;外周全血细胞散射光双参数点图（红细胞溶解后）;2，荧光信号;流式细胞仪的电子系统; 当含细胞的液滴逐个通过激光束时，受到两种检测器的检测:如果液滴中含有细胞就会激活干涉检测器(interference detector)，只有带有荧光标记细胞的液滴才会激活荧光检测器(fluorescence detector)。当带有荧光标记的液滴通过激光束时，将两种检测器同时激活，引起液滴充电信号使鞘液带上负电荷。由于液滴带有负电荷，移动时就会向正极移动，进入到荧光标记细胞收集器中。。;流式细胞仪分选系统;;流式细胞仪的科研应用;;How to analyze soluble proteins in FCM?;Multiplexed Beads;Beads Provide a Flexible Platform;Example 6-bead assay;CBA Standard curves;流式细胞术的临床应用;流式细胞仪 的数据处理;数据处理;流式细胞仪数据分析（1）;流式细胞仪数据分析（2）;流式细胞仪数据分析（3）;Gating;Compensation;compensation;Date;G0-G1;细胞凋亡检测技术;1 荧光信号的面积：对荧光光通量进行积分 ;凋亡细胞的特点; Annexin V/PI双染 活细胞为（Annexin V-/PI-） 坏死细胞为（Annexin V+/PI+） 凋亡细胞（Annexin V+/PI-） ;细胞周期不能区分凋亡与死亡细胞 Sub-G0/G1 peaks --- PI staining;Annexin V Assay建议用于悬浮细胞;Annexin V Assay能够区分死亡与凋亡;