第一章绪论1.（M）基因工程是通过基因操作，将目的基因或DNA片段与.doc

第一章 绪论 1.（M）基因工程：是通过基因操作，将目的基因或DNA片段与合适的载体连接转入目标生物细胞，通过复制、转录、翻译外源目的基因及蛋白质的活性表达，是转基因生物获得新的遗传特性的操作。技术上包括基因或DNA的体外重组、转基因、重组子筛选扩大繁殖等多个环节。 2.基因工程的基本条件（要素）及作用 （1）目的基因：是开展基因工程的目标和物质基础； （2）载体：将目的基因引入宿主细胞进行复制或表达； （3）工具酶：完成DNA分子的体外切割与连接； （4）受体细胞：摄取外源重组DNA并使其稳定维持和表达。 3.基因工程操作的基本环节（注意顺序） （1）切：用限制性内切酶分别切割外源DNA分子和载体分子； （2）接：用DNA连接酶将含有外源基因的DNA片段连接到载体分子上，形成重组DNA分子； （3）转：将重组DNA分子转入受体细胞； （4）增：将含有重组DNA分子的受体细胞培养扩增，获得大量细胞繁殖群体； （5）选：筛选鉴定转化细胞，获得使外源基因高效稳定表达的基因工程菌或细胞。 4．（M）基因操作: 应用DNA重组技术, 对生物有机体的遗传物质进行修饰与改造, 或将外源基因导入宿主细胞, 获得新的遗传性状,达到改造生物遗传特性的目的。 5．（M）Gene cloning or DNA cloning: 一种生物体的基因与载体在体外拼接重组, 而后转入寄主细胞进行复制, 以获得大量DNA或基因拷贝的操作技术。 6.基因工程的基本特点: ①分子水平的操作、细胞水平的表达； ②打破物种界限,突破亲缘关系的限制, 加快变异的程度和速度； ③定向变异,育种,定性改造生物; ④创造自然界没有的新物种。 7.基因工程的技术流程(步骤)①材料的准备: 目的基因、工具酶、载体和受体细胞(宿主)的获得; ②构建重组DNA 分子;③转化或转染; ④重组子的扩增和筛选; ⑤表达产物的分离纯化。 8. 了解：DNA重组技术是学科交叉的产物. 这一技术的开拓者和创始人,美生化学家Paul Berg借助类似工程设计的方法,利用限制酶和连接酶处理SV40病毒、l噬菌体基因与E.coli DNA片段,最终两个不同来源的DNA片段连接在一起并发挥其应有的生物学功能. 这是世界上首次完成的基因重组和DNA人工转移的重大创新研究,证明了完全可以在体外对基因进行操作,从而为人类主动改变生物的性状和功能,创造更加适合于人类需要的新生物提供了重要方法,开创了遗传工程的新纪元. Berg (Stanford U) 获得1980年诺贝尔化学奖. Stanley Cohen (Stanford U) 构建成含tet、kan(卡那霉素)基因的重组质粒,导入E.coli, 表达出双抗特性. Cohen (1973): 非洲爪蟾的rDNA与pSC101重组, 转入E.coli, 后者产生出爪蟾rRNA. 1973年被定位基因工程元年。 9.研究基因工程的意义 （1）大规模生产生物分子 （2）设计构建新物种 （3）破解人体遗传信息 （4）打破常规育种难以克服的物种间的遗传障碍, 突破亲缘关系的限制, 使不同生物间的遗传信息进行重组和转移, 创造出自然界没有的生命形态, 以满足人类社会的需要。 第二章 基因工程的酶学基础 10.（M）限制性内切酶（restriction endonulease,RE）：是一类能够识别DNA分子中的特定核苷酸序列，并切割DNA双链结构的内切核酸酶。 11.（E）R-M：限制和修饰作用。 12.（E）Mtase：甲基转移酶。 13.限制性修饰系统：原核细胞为保护自己，选择性降解外源DNA的一种机制。包括两类酶，限制性内切酶核酸酶和DNA甲基化酶。前者负责降解进入原核细胞的外源DNA，后者则对细胞自身的DNA进行甲基化，从而保护细胞的DNA，使其不被细胞的限制性内切核酸酶降解。 14.酶的星号活性：限制性内切酶核酸酶识别和切割特异性位点是在特定条件下测定的，当条件改变时，许多酶的位点会改变，导致识别与切割序列的非特异性，这种现象成为酶的星号活性。 15.碱性磷酸酶：是一种能够将对应底物去磷酸化的酶，即通过水解磷酸单脂底物分子上的磷酸基团，并生成磷酸根离子和自由羟基。 16.hsd R: 内切酶；hsd M: 修饰酶；hsd S: 协助。 17.了解：Arber最早提出R-M假说, 并于1968年首先发现I型限制酶; Smith(1970) →II型。 18. SAM: S-腺苷甲硫氨酸. II型酶的切割位点在识别序列内或附近, 进行特异切割; I型无特异性, 在识别位点外1kb处随机切割; III型在识别序列下游24-26 bp处切割 19.影响限制性内切核酸酶活性的因素 （1）没的纯度； （2）DNA样品的浓度； （3）DNA的甲基化程度； （4