基因工程与蛋白质工程（ 43页）.pptVIP

基因工程与蛋白质工程;一、基因工程定义及主要内容;主要步骤： 1.带有目的基因的DNA片段的获得 2、构建DNA重组分子 3、重组DNA分子引入宿主细胞和筛选鉴定 4、基因的表达 ;返回;构建DNA重组分子;工具酶;限制性核酸内切酶;限制性核酸内切酶;限制性核酸内切酶;限制性核酸内切酶;几种限制性内切酶的作用位点;几种限制性内切酶的作用位点;目的基因的制备;目的基因的制备：人工合成法;目的基因的制备：逆转录法;目的基因的制备：逆转录法;返回;目的基因的制备：逆转录法;用限制酶切法直接从染色体DNA中分离; 基因文库的构建 将总DNA包含的基因组各片段分别克隆在质粒或噬菌体载体上，转化大肠杆菌,便构成了该生物的基因文库。;用限制酶切法直接从染色体DNA中分离;用PCR方法扩增目的基因片段;用PCR方法扩增目的基因片段;克隆载体;克隆载体;克隆载体pBR322;克隆载体;克隆载体;DNA??子的体外重组;粘性末端连接法;返回;返回;钝性末端连接法;钝性末端连接法;二、重组DNA引入宿主细胞和筛选鉴定;插入灭活法;返回;三、克隆基因的表达;四、基因工程的成就与展望;“后基因组时代”将是“蛋白质组学时代”，即从对基因信息的研究转向对蛋白质信息的研究，包括研究蛋白质结构、功能与应用及蛋白质相互关系和作用。 蛋白质工程就是在对蛋白质的化学、晶体学、动力学等结构与功能认识的基础上，对蛋白质人工改造与合成，最终获得商业化的产品。;蛋白质工程的主要步骤通常包括： （1）从生物体中分离纯化目的蛋白； （2）测定其氨基酸序列； （3）借助核磁共振和X射线晶体衍射等手段，尽可能地了解蛋白质的二维重组和三维晶体结构;;思考题;插入灭活法