微生物的培养教程.ppt

课题1 微生物的实验室培养;微生物包括哪五类：;细菌的外形与大小;细菌细胞由外向里依次有鞭毛、菌（纤）毛、荚膜、细胞壁、细胞膜、细胞质，细胞质中又有液泡、储存性颗粒、核质等。;*细胞壁;芽孢;菌落：;菌落;真菌的营养类型 ;放线菌;链霉素、土霉素、四环素、 氯霉素、红霉素、庆大霉素 ;病毒的结构;病毒;SARS病毒、 禽流感病毒;朊病毒（蛋白质病毒）;2、病毒的增殖：;真菌;;生殖;; 了解有关培养基的基础知识，进行无菌技术的操作，进行微生物的培养。;一、基础知识：; 2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方 (参考教材附录内容);选择培养基;鉴别培养基; 根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。 合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。 优点：标准化生产，组分和含量相对固定;成本低 缺点： 缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。 ; 天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。 优点：营养成分丰富，培养效果好 缺点：来源受限;成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析;易发生支原体污染;;血清中含有： ①多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等） ②多种金属离子； ③激素； ④促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等。 ⑤各种生长因子 ⑥转移蛋白 ⑦不明成分;液体培养基：;固体培养基：菌落，菌苔;半固体培养基：;4.培养基的用途;（二）无菌技术;（1）对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。 （2）将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。 （3）为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。 （4）实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。;　（１）消毒定义： 　　利用较为温和的化学或物理方法，杀死物体表面或内部的部份致病微生物（不包括芽孢和孢子）的过程。 区分为高程度消毒（High-level Disinfection）、中程度消毒（Intermediate-level Disinfection）、低程度消毒（Low-level Disinfection）三种方式。;　　（2）灭菌的定义：;分类;1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min 2、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮15min 3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源 4、紫外线消毒 ……;1、灼烧灭菌 2、干热灭菌：160-170 ℃下加热1-2h。 3、高压蒸气灭菌：100kPa、121 ℃下维持15-30min.; 最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。 有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。 而平皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。 ;微生物实验室培养的基本操作程序;1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？;二、实验操作;1．计算、称量 2．溶化 3．调pH：　pH7．6　 4．灭菌:将50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞（加塞），包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。将培养皿用旧报纸包裹（包扎），放入干热灭菌箱内，在160～170 ℃下灭菌2h。分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。;5．倒平板: 待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种. ;1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？;3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？;6．无菌检查： 将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。;（二）纯化大肠杆菌;;;问题讨论;2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？;稀释涂布平板法：是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。 在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而在培养基表面形成单个的菌落。;;;