不同浓度6ba、ga3对农杆菌介导的大豆子叶节遗传转化率的影响__学位论文.doc

各专业完整优秀毕业论文设计图纸 学号：20090410492009041049 哈尔滨师范大学 学士学位论文 题 目 不同浓度6-BA、GA3对农杆菌介导的大 豆子叶节遗传转化率的影响 学 生 指导教师 年 级 2009级 专 业 生物技术（生物制药） 系 别 生物工程与技术系 学 院 生命科学与技术学院 哈 尔 滨 师 范 大 学 学士学位论文开题报告 论文题目 不同浓度6-BA、GA3对农杆菌介导的大豆 子叶节遗传转化率的影响 学生姓名 指导教师 李新玲 副教授 年 级 2009级 专 业 生物技术（生物制药） 2012年 8月 说 明 本表需在指导教师和有关领导审查批准的情况下，要求学生认真填写。 说明课题的来源（自拟题目或指导教师承担的科研任务）、课题研究的目的和意义、课题在国内外研究现状和发展趋势。 若课题因故变动时，应向指导教师提出申请，提交题目变动论证报告。 课题来源： 自拟题目 课题研究的目的和意义： 大豆是我国重要的油料作物之一，是人民生活中的植物蛋白和油份的重要来源，也是主要的工业原料。大豆是目前公认的较难进行遗传转化的植物，主要是因为大豆的再生率较低，高效大豆再生体系的建立是大豆遗传转化的基础。虽然我国已克隆了具有自主知识产权的抗除草剂基因，但大豆的遗传转化受很多因素的影响，遗传转化率不高，减缓了利用遗传转化方法进行大豆品种改良的速度。本实验利用农杆菌介导的大豆子叶节转化系统，对共培养、丛生芽、芽伸长等组织培养条件和植物激素配比进行优化分析，旨在探索提高大豆遗传转化效率的可能性，为建立高效的大豆遗传转化体系提供理论依据，以获得能够抗除草剂的大豆植株品种。 国内外同类课题研究现状及发展趋势： 大豆转基因研究始于1984年，自1988年Hinchee等用农杆菌侵染大豆子叶节获得转基因大豆植株以来，大豆的遗传转化研究受到广泛的重视，农杆菌介导法也成为大豆分子育种和基因功能研究的重要手段。1988年Meurer等报道了农杆菌转化大豆子叶节的影响因素，发现用超声处理过的子叶节较对照容易转化。1999年Zhang等以Bar 基因作为筛选标记基因，农杆菌法转化大豆子叶节频率达3%。2003年Olhoft等相继报道了在培养基中添加硫醇类化合物和L-半胱氨酸可以防止由农杆菌侵染导致的组织坏死现象，从而提高转化频率。2006年Paz等以无菌水浸泡16h的子叶节为外植体进行转化，遗传转化效率达到了1.4%～7.8%。2010年Yamada 等通过用微型金属毛刷对子叶节外植体造成机械损伤以及在侵染液中加入0.02%的SilwetL-77使遗传转化效率从1.0%提高到4.4%。 目前，大豆再生所用的外植体主要有子叶节，无菌苗的茎尖，未成熟胚子叶，上胚轴和初生叶，子叶，成熟胚的胚尖等。大豆子叶节是遗传转化中应用最普遍的外植体，是大豆遗传转化应用最广泛的方法。2007年李文霞等以大豆品种黑农35的子叶节为材料，研究6-BA对子叶节再生三个阶段即无菌苗萌发、丛生芽诱导、丛生芽伸长的影响。2010年杜升伟等研究优化了包括种子消毒方法、生长调节剂用量和抗生素种类在内的影响农杆菌介导大豆子叶节遗传转化效率的多个因素。2011年孙明杰等研究了大豆子叶节高频愈伤组织诱导及其植株再生，以萌发以萌发7d的大豆子叶节切断及其切片为外植体，研究了萌发培养基、不同激素及其配比对大豆子叶节愈伤组织诱导与分化的影响。2011年武小霞等对大豆子叶节再生中植物生长调节剂浓度及基因型筛选进行了研究，以黑农35为实验材料，对大豆子叶节再生过程中种子的灭菌方法、萌发培养基中植物生长调节剂的浓度、丛生芽分化、生根培养与驯化等过程中植物生长调节剂的浓度进行了研究。 课题研究的主要内容和方法，研究过程中的主要问题和解决办法： 课题研究的主要内容： 利用农杆菌侵染大豆子叶节，研究在共培养和芽诱导等阶段，6-BA、GA3激素水平的不同，对不定芽萌发率的影响，目的是提高大豆转化效率，优化大豆遗传转化体系，更好更高效的获得携带抗除草剂基因的大豆品系植株。 课题研究的方法：农杆菌介导的大豆遗传转化法 研究过程中的主要问题： 对共培养、丛生芽、芽伸长、生根四个阶段组织培养条件和植物激素配比进行优化分析。 拟解决的关键问题： 旨在优化大豆的遗传转化体系，提高外源基因的转换效率，为提高大豆遗传转化提供理论依据。 解决办法： 查阅相关资料，阅读相关书籍和期刊，向老师请教及利用网络资源进行查询，并查找研究人员做过的有关实验，最后整理成文字，完成论文。 课题研究起止时间和进度安排： 2012年7月—2