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CD105、CD146在大肠癌组织中的表达及对预后判断的价值 河北省秦皇岛市肿瘤医院 康文喜 岳秀杰 单妍 王小聪 邮编：066001 摘 要: 目的 探讨血管内皮标志物CD105、CD146在大肠癌中的表达及对肿瘤预后判断的意义。方法 用免疫组织化学染色（SP三步法）和流式细胞仪检测法联合检测200例大肠癌组织CD105、CD146的表达情况，分析大肠癌不同分期、不同分化程度以及与转移和判断预后的关系。结果 免疫组化法：CD105、CD146在大肠癌组织中的表达呈强（+），MVD计数：大肠癌组织CD105为47.33±5.54，CD146 为30.73±7.15，正常大肠组织CD105为4.91±1.37 ，CD146 为2.88±0.50，（P＜0.05）；流式细胞术检测法：CD105+CD146+在大肠癌组织中表达为21.37±4.79%，正常大肠组织中表达为5.73±1.99 ，P＜0.05；两种检测方法均显示，大肠癌组织中的CD105、CD146的表达明显高于正常大肠组织，而且在不同Dukes分期、不同分化程度的大肠癌中，CD105、CD146的表达亦有显著差异，（P＜0.05）结果有统计学意义。 结论 免疫组化法和流式细胞仪检测法联合检测大肠癌组织中CD105、CD146的表达可能是判断大肠癌患者转移及预后判断的重要指标。 关键词： CD105 CD146 流式细胞仪 大肠癌 免疫组化SP法 肿瘤血道转移是肿瘤患者死亡的重要原因，肿瘤实质内血管生成已经逐渐引起了人们的重视【1】。CD105、CD146表达于血管内皮细胞，是研究肿瘤新的重要抗体。本文收集大肠癌200例，通过免疫组化和流式细胞仪检测法联合检测CD105、CD146在大肠癌组织中的表达程度，探讨CD105、CD146在大肠癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系，分析CD105、CD146在大肠癌发生发展及对预后判断中的重要价值。 1.资料和方法 1.1 临床资料 本组收集2008年3月-2010年12月我院外科住院患者，其中男性146例，女性54例，年龄27~79岁，平均年龄49岁。200例中，盲肠16例、升结肠57例、横结肠23例、降结肠43例、直肠61例，同时取同源的正常大肠组织作对照。巨检：200例大肠癌中，隆起型36例、溃疡型75例、浸润型46例、胶样型43例。每例标本取组织块10-15块不等，组织学分型：高分化腺癌 115例，中分化腺癌65例，低分化腺癌20例。有淋巴结转移者124例，无淋巴结转移者76例。Dukes分期：DukesⅠ期13例、 DukesⅡ期63例、 DukesⅢ期124例。 1.2 主要仪器 流式细胞检测仪购自美国贝克曼库尔特公司。 1.3 主要试剂 流式细胞检测所用的鼠抗人CD105-FITC、CD146-PE 、 CD45-PC5单克隆抗体购自美国贝克曼公司。免疫组化SP法试剂盒购自北京中杉公司。 1．4 方法 所有组织块均采用10%福尔马林固定、常规石蜡切片、HE染色和免疫组化染色，普通光学显微镜观察。免疫组化采用SP三步法，在血管内皮细胞胞膜或胞浆中表达，阳性呈棕黄色颗粒。MVD 计数方法参照 Weidener 校正方法并作修改【2】，阳性显色的单个内皮细胞或细胞团,不管有没有形成管腔,只要与周围的微血管、肿瘤细胞和其它连接组织有一个清楚的界限,都认为是一个可计数的微血管，而有平滑肌壁及管腔直径约＞ 8 个红细胞直径的血管需排除在外。在微血管最多的区域计数3个不同高倍镜视野下微血管数取其平均值，微血管数≥3个判断为阳性。流式细胞仪检测法，取手术后大肠癌组织和同源的正常大肠组织分别制备成单细胞悬液，调节细胞数为1×106，分别加入CD105-FITC、CD146-PE各10ul避光孵育15min，加入2mlPBS，离心1500转沉淀5min，PBS洗2次，弃上清，混均后加入适量PBS上机检测。 1.5统计学处理 所有数据均采用SPSS13.0统计软件进行， 定为P＜0.05有统计学意义。 2.结果 2.1 CD105、CD146在大肠癌组织及正常肠壁组织中均有表达，但大肠癌组织中表达数量增多，阳性表达的血管内皮细胞可为单个细胞，亦可几个细胞连接成条索状或团状，大部分阳性表达的血管结构不完整，管腔不规则，少数区域可见圆形或椭圆形血管腔。正常肠壁组织中血管表达数量少，血管结构大多数较完整，呈圆形、长条形，不规则形。免疫组化法：大肠组织CD105 CD146较正常大肠组织CD105 CD146增高，流式细胞检测法：大肠癌组织CD105+ CD146+较正常大肠组织增高，P＜0.0 5具有明显的差异。（见于表Ⅰ） 表Ⅰ大肠癌组织与正常大肠组织果的比较 组 别 免 疫