CWB-SOP-QC-173检测用菌种保藏传代标准操作规程.docVIP

文件名称 （英文名称）检测用菌种保藏传代标准操作规程 SOP for testing bacterial strain’s storage and passage method上海凯茂生物医药有限公司 SHANGHAI CHEMO WANBANG BIOPHARMA CO. , LTD文件编号CWB-SOP-QC-173版本号2.0生效日期页数/页码共  NUMPAGES \* Arabic \* MERGEFORMAT 2 页 第  PAGE 2 页 起草人：审核：QA审核：批准人：日期：日期：日期：日期： 目的： 为确保实验用菌种保藏传代操作的正确性，特制定本规程。 适用范围： 实验用菌种。 引用标准： 《中国人民共和国药典》2010年版三部。 职责： 由相关技术人员操作并互检，主管审核。 工作流程： 本实验室所使用的菌种均为检验用菌毒种，应从国家药品检定机构或国务院药品监督管理部门认可的单位（如各省市药品检定所）购买。购买的菌毒种应为3代以内（包括3代），从中国药品生物制品检定所购买的冻干菌粉为0代。 菌、毒种管上应有牢固的标签，标明菌毒种的编号、代次、传代日期。 不同属或同属菌毒种的强毒株及弱毒株不得同时在同一洁净室内操作。 使用菌种，实行专人保管，专人使用，负责菌种的验收、保藏、定期传代，销毁、并做好记录。 在使用中如发现菌毒种、细胞染杂菌或形态与形状发生改变应马上停止使用。 菌种传代： 用接种环经火焰灭菌后，冷透进入保藏菌种斜面取菌，接种于营养琼脂斜面（或改良马丁琼脂斜面），分别接种保藏菌种斜面（传代用）和工作菌种斜面（日常试验用）；同时接种营养琼脂平板或改良马丁琼脂平板，从平板上部引种，向下波浪型划线，进行分离，经30?C～35?C或20～25?C培养一定时间后，取出2～8?C冰箱保存。 菌种传代要求：保藏菌种每月都要传代，同时进行菌种纯度检查，纯度检查合格后方可使用新代菌种，销毁旧代菌种。 菌种及保藏方法： 现有菌种： 金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26 003] 铜绿假单胞菌[CMCC(B)10 104] 枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63 501] 生孢梭菌[CMCC(B) 64 941] 大肠埃希菌[CMCC(B)44 102] 白色念珠菌[CMCC(F)98 001] 黑曲霉[CMCC(F)98 003] 保藏方法： 斜面保藏法：将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌生长充分以后，转移至2～8℃冰箱保存。每月需转接一次，代次超过5代的菌种应做销毁处理。 菌种种类传代用培养基传代间隔时间培养温度保藏条件金黄色葡萄球菌营养琼脂培养基一个月30～35℃2～8℃冰箱保存铜绿假单胞菌营养琼脂培养基一个月30～35℃常温保存枯草芽孢杆菌营养琼脂培养基一个月30～35℃2～8℃冰箱保存生孢梭菌硫乙醇酸盐流体培养基一个月30～35℃2～8℃冰箱保存大肠埃希菌营养琼脂培养基一个月30～35℃2～8℃冰箱保存白色念珠菌改良马丁琼脂培养基一个月20～25?C2～8℃冰箱保存黑曲霉改良马丁琼脂培养基一个月20～25?C 2～8℃冰箱保存 甘油管保藏法：将待保藏菌种转接至适宜培养基，细菌在适宜温度（细菌一般为30-35℃，真菌为20-25℃）下培养一定时间（细菌一般为16-24小时，真菌为48-72小时）使其成为均匀菌液。向已制备好的菌悬液中加入等体积浓度为20%的无菌甘油，得到10%甘油菌悬液。分装至已灭菌的eppendorf管中，每管1.0ml，并标记菌种名称、代次、编号、传代时间，于-20℃保存，有效期为3年。 液体石蜡覆盖保藏法：将液体石蜡经121℃ 30分钟灭菌后取出置于110℃烘箱中2小时烘干水分，以无菌操作加入到培养好的菌种试管中，使液体石蜡高出培养基上端1cm，将试管直立放于2～8℃保存。铜绿假单胞菌应置于常温保存。有效期为1年。 菌种销毁：不再使用的菌种管应及时销毁，经121℃，30分钟单独灭菌后倒出其中培养物，充分冲洗后才可与其它玻璃器皿同时洗涤。 报告和记录表式：无 该文件需发放部门：质量控制部 替代文件：《检测用菌种保藏传代标准操作规程》，文件编号：CWB-SOP-QC-173，版本号：第一版。 修订历史：修改表头格式、版本号、工作流程。