QCSOP027-色谱柱的使用维护和保管.doc

上 海 津 力 化 工 有 限 公 司 标 准 操 作 程 序部 门： 质量检验部编 码： S0P-QC-027-1题 目： 液相色谱柱的使用、维护和保管页 码： 共 5 页 / 第  PAGE \* MERGEFORMAT 8 页新 订：√　替 代：起草人：审核人：批准人：生效日期：审阅部门： 1. 目的：加强液相色谱柱的使用、维护、清洁与保管的管理，保证检测结果的准确性及延长色谱柱的使用时间。 2. 范围：所有高效液相色谱检测时所用的色谱柱。 3. 责任人：QC主任、检验员对本SOP的实施负责。 4. 程序： 液相色谱柱是色谱分离系统的核心部分，装有不同类型填料的色谱柱与相对应的流动相与相对应的流动相形成了不同的分离机制，对绝大多数有机化合物进行分离分析。 4.2 根据色谱柱内径的不同，液相色谱柱可分为微径柱、分析柱、快速柱、半制备柱、制备柱等，适用于不同的分离分析目的。常用的普通分析柱，内径通常为4.6mm,柱长15?25cm，填料粒径5?10?m，用于常规的分离。 4.3 QC常用色谱柱类型及用途： 4.3.1 普通ODS柱：固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，对各种类型的样品均有较好的分离效果，使用范围比较广泛 非极性键合相：非极性键合相主要包括不同链长的烷基（C1、C2、C4、C6、C8、C16、C18、C22等）和苯基。键合烷基的链长对键合相的样品负荷量、溶质的K’值和选择性均有影响。当烷基键合相的表面浓度（umol/m2）相同时，烷基链长增加，碳载量成正比增加，溶质的保留值增大。短链烷基键合相（C6、C8等）因链长较短，与硅胶表面键合时比长链烷基有更高的覆盖率，且残余硅羟基更少，更适合极笥样品分离；而长链烷基键合相（C16、C18、C22等）因碳载量较高，疏水性较好，对各种类型的样品有更强硬态度的适应能力。其中十八烷基硅烷键合硅胶，又称ODS，最常用的非极性键合固定相。 极性键合相：极性键合相常用的有氰基（CN）、二醇基（DIOL）和氨基（NH2）键合相等。 氰基键合相的的分离特性与硅胶相似，但极性相对较弱，优点是梯度洗脱或流动相组成改变时平衡快，溶质间不可逆吸附或副反应减少，对双键异构体或含不等量双键数目的环状化合物有很好的分离能力。 二醇基键合相一般是缩甘油氧丙基硅烷键合相的水解产物[-Si-(CH2)2-O-CH2-CHOH-CH2OH],对有机酸和某些高聚物有较好的分离，也可用 球鞋要些蛋白质的水系体积排阻色谱。 氨基键合相的分离特性与硅胶有很大差异，Si-OH基呈酸性，而-NH2基呈碱性，二者用于正相洗脱时，所表现的选择性不同。-NH2基的选择性首先表现为强的氢键结合能力；其次在酸性介质中为弱阴性离子交换作用，叔胺基和糖类分子的羟基有相互作用，采用乙腈-水系统可分离单糖、双糖、多糖等。 离子交换键合相：离子交换键合相是指键合的有机硅烷分子中带有固定的阳离子或阴离子交换基团，可分为阳离子交换剂（含磺酸基或羧酸基）阴离子交换剂（含季铵基或氨基）两类。以硅胶为基质的离子交换键合相的主要特点是刚性和耐压性，克服了树脂的溶胀和收缩现象，因此，同一根色谱柱上可以按照分析对象的具体要求在一较宽范围内改变流动相的离子强度、PH值以及有机相的种类和含量等。 手性固定相：手性固定性是特指利用一定的作用机制，能选择性分离对映体的填料，根据分离机理，可大致分为以下几类： 类型化学组成分离机理刷型（Brush-type,Pirkle）多种手性基团通过离子或共价作用力键合到硅胶表面 三点作用模型相互作用力：氢键，电荷转移（P-P作用），偶极堆叠，立体位阻效应螺旋型聚合物（Helical polymers）天然纤维素及其衍生物 合成高聚物相互作用力 插入型络合物立体空穴（Cavity）环糊精及基衍生物，能与大多数有机分了形成主-客体包容络合物分子中有多个立体中心，呈截锥形圆筒状构型配体交换（Ligand Exchange）氨基酸与过渡多属阳离子形成非对映的金属络合物非对映的金属络合物蛋白质（Protein）①ɑ－酸性糖蛋白（AGP） ② 牛血清白蛋白（BSA）/人血清白蛋白（HAS）①静电与疏水效应 ②极性作用力各色谱柱公司对手性固定相的研发，基本上自成体系。Dilma公司推出的Chiral-AGP系列是利用蛋白质ɑ－酸性糖蛋白（ɑ－acid glycoprotein Abb. AGP）作为手性中心来分离手性化合物；而CYCLOBOND系列属于环糊精手性固定相；CHIROBIOTIC系列则是以大环乙二醇多肽类如万古霉素（CHIROBIOTIC V）、Teicoplanin(CHIROBIOTIC T)\Teicop