S型与R型人参皂苷Rh2对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响.doc

S型与R型人参皂苷Rh_2对人肺腺癌A549 细胞增殖和凋亡的影响 张春晶 于海涛 侯金才 （齐齐哈尔医学院 神武化学与分子生物学教研室 生物遗传教研室，黑龙江 齐齐哈尔 162042） 【摘要】 目的：探讨人参皂苷Rh2（S型与R型）对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响，以阐述人参活性成分抗肿瘤活性的购效关系及可能机制。 方法：采用MTT实验测定细胞增殖：碘化丙啶（PI）单染流式细胞仪分析细胞周期中各时期的细胞百分数，观察人参皂苷Rh2对人肺腺癌A549细胞增殖周期的影响。Annexin V-PI双染流式细胞术检测细胞凋亡，采用免疫荧光实验对作为细胞凋亡标志的Caspase-3活性进行测定。 结果：人参皂苷Rh2对人肺癌A549细胞毒活性明显存在购效关系，其中25mg·L-1 的20（R）-人参皂苷Rh2和20（S）-人参皂苷Rh2作用48h对肿瘤细胞株A549的增殖抑制率分别为28.5%，33.6%，IC50值分别为33.5,28.5·L-1 。20mg·L-1的20（S）-人参皂苷Rh2作用A549细胞24h后G0/G1期细胞比例显著高于对照组（P0.01），S期细胞比例显著地狱对照组（P0.01），G2/M期细胞比例与对照组比较无显著性差异，说明20（S）-人参皂苷Rh2能阻滞细胞周期与G1期。30mg· L-1 的S型和R型人参皂苷Rh2作用A549细胞24h后，无论是早起还是晚期凋亡率均明显高于正常组细胞（P0.05），并且20（S）-人参皂苷Rh2组早期凋亡率明显高于20（R）-人参皂苷Rh2组，表现出明显的购效效应（P0.05）。20（R）-人参皂苷Rh2和20（S）-人参皂苷Rh2作用6h的A549细胞中标记Caspase-活性的荧光亮度明显增强，说明Caspase-3的激活参与了人参皂苷Rh2诱导的A549细胞凋亡。结论：S型和R型人参皂苷Rh2人参皂苷Rh2均可剂量依赖性地抑制A549细胞增殖，并且20（S）-人参皂苷Rh2的抗肿瘤活性明显强于20（R）-人参皂苷Rh2，阻滞细胞周期于G1期，具有购效效应：S型和R型人参皂苷Rh2均具有促进A549细胞凋亡作用，并且20（S）-人参皂苷Rh2组早起凋亡率明显高于20（R）-人参皂苷Rh2组，具有购效效应。 【关键词】 人参皂苷Rh2；人肺腺癌A549细胞；细胞周期；凋亡 肺癌是一种严重影响人类生命健康的疾病之一，目前已成为世界上发病率和死亡率最高的恶性肿瘤。目前，肺癌病因及发病机制尚未完全阐明，但从肿???细胞学来看，肺癌发生的本质在于细胞增殖与凋亡的调节失控。近年来中药的抗癌机制研究取得了很大的进展，尤其对肺癌细胞增殖周期的调控与诱导细胞凋亡两方面内容。积极寻找特效和低毒的肿瘤防止药物成为当今我国乃至世界面临的紧迫任务之一。 尽10多年来，有关人参皂苷Rh2抗肿瘤活性的研究取得了很大的发展。体内及体外抗肿瘤研究表明，具肿瘤细胞毒活性的人参皂苷多为一些人参次苷及苷元，人参次苷及苷元的抗肿瘤临床价值已引起人们高度重视。人参皂苷Rh2（ginsenoside-Rh2,G-Rh2或Rh2）有C20位立体构型（S/R），20（S）-人参皂苷Rh2具有非器官特异性的光谱抗肿瘤作用，由于不同的肿瘤细胞具有不同的遗传背景，人参皂苷Rh2对不同的肿瘤细胞通过不同机制发挥作用。但人参皂苷Rh2影响人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡作用的购效关系评价，国内外尚未见报道，他们对肺癌细胞的作用靶点以及用于治疗肺癌的研究国内外报道甚少。本实验以人肺腺癌A549细胞为模型，对人参皂苷Rh2（S型与R型）的人肺腺癌A549细胞毒活性进行评价，探讨人参皂苷Rh2（S型与R型）对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响，以阐述人参活性成分抗肿瘤活性的购效关系及可能机制。 材料 1.1 药物和制剂 20（S）-人参皂苷Rh2，即20（S）-原人参二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和20（R）-人参皂苷Rh2，即20（R）-原人参二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷购自中药药品生物制品鉴定所，本室提纯。A549细胞购自中国协和医科大学基础医学细胞中心。优质胎牛血清（Hyclone,美国），DMEM干粉（Gibco,美国），0.25%胰酶-0.02%EDTA（吉诺生物医药技术有限公司），噻唑蓝（MTT）、细胞周期检测试剂盒（中国上海贝博生物有限公司），AnnexinV-PI双染试剂盒（普利莱公司），兔抗Cleaves Caspase-3（Cell signal公司），荧光Cy30标记二抗（康为试剂），DAPI（Roche公司）。 1.2 仪器 IX81倒置荧光显微镜（Olympus）；FACS420流式细胞仪（COULTER EPICS? XL，美国Becton公司）。 2 方法