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实验五胰岛素肾上腺素对血糖浓度的影响
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实验六 胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响
实验五 葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖
课程名称:生物化学与分子生物学实验课 年级:2004
专业、层次:临床医学本科 授课教师:汪宗桂
职称:助教 学时:3学时
基本教材:自编 《生物化学与分子生物学实验指导》
教学目的与要求:
1、观察胰岛素和肾上腺素对家兔血糖浓度的影响。
2、掌握血糖浓度的测定方法。
3、掌握葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的原理和方法。
4、掌握血糖浓度的正常参考值,了解血糖测定的临床意义。
大体内容与时间安排:
1、胰岛素和肾上腺素对血糖浓度影响的原理 5min
2、胰岛素和肾上腺素对血糖浓度影响的注意事项 5min
3、葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的原理 5min
4、葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的操作改动及注意事项 5min
5、学生做实验 100min
教学方法:讲授式+启发式
教学重点、难点:
重点:1、葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的原理
2、葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的注意事项
难点:葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的注意事项
一、实验原理
(一)胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响
激素是调节机体血糖浓度的重要因素。胰岛素能降低血糖,肾上腺素等激素能升高血糖。
本实验给两只家兔分别注射胰岛素或肾上腺素,取注射前、后兔的静脉血,测定血糖含量,观察注射前后血糖浓度变化,从而了解胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响。
(二)葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖
本实验是葡萄糖氧化酶 (GOD)和过氧化物酶 (POD) 相偶联发生的偶联反应。
第一步:葡萄糖氧化酶利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸,并释放过氧化氢。
第二步:过氧化物酶在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧,并使色原
性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物(苯醌亚胺非那腙)。
二、操作步骤
(一)胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响
1、动物准备:取正常家兔两只,实验前预先饥饿16小时,称体重(—般为2-3kg)。
2、注射激素前取血:—般多从耳缘静脉取血:剪去耳毛,用二甲苯擦拭兔耳,使其血管充血,再用干棉球擦干,于放血部位涂一薄层凡士林,再用粗针头或刀片刺破静脉放血。采用葡萄糖氧化酶—过氧化物酶法时,则将静脉血收集于干净试管中,静置至血清析出。取血完毕,用干棉球压迫血管止血.
3、注射激素:—只兔子注射胰岛素;皮下注射,剂量为0.75U/kg体重。另一只兔子注射肾上腺素:皮下注射,剂量为0.4mg/kg体重。分别记录注射时间。
4、注射激素后取血:方法同上;取血时间:肾上腺素注射后30分钟;胰岛素注射后1小时。从注射胰岛素的兔子取血后,应立即用10ml 250g/L葡萄糖做腹腔内或皮下注射,以防家兔发生胰岛素休克(低血糖休克)。
5、测定血糖:分别测定各血样的糖含量,方法请见实验四“血糖测定”。
6、计算:计算注射胰岛素后血糖降低和注射肾上腺素后血糖增高的百分率:
△BS=注射后BS—注射前BS;“+”值表示BS升高;“—”值表示BS降低(BS—血糖)。
(二)葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖
1、取试管3支,按下表操作。
葡萄糖氧化酶法测血糖操作步骤
加入物(ml)空白管标准管测定管血清--0.01葡萄糖标准应用液-0.01-蒸馏水0.01--酶酚混合试剂1.51.51.5混匀,置37℃水浴中,保温15min,加2ml水混合后在波长505nm处比色,以空白管调零,读取标准管及测定管吸光度。
2、计算:
三、注意事项
(一)胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响
1、剃兔耳毛时,先用水润湿后在剃毛,要求耳缘静脉四周要剃干净,否则取血时易引起溶血;
2、选用腹部皮肤作胰岛素和肾上腺素皮下注射 ,一手轻轻提起腹部皮肤,另一手持注射器以45°进针,针头不要刺入腹腔,更不要穿破皮肤注射到体外。
(二)葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖
1、最后加酶酚混合试剂,各管反应时间应一致;
2、因用血量甚微,操作中应直接加样本至试剂中,再吸试剂反复冲洗吸管,以保证结果可靠;
3、葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量,但不能直接测定尿液葡萄糖含量;
4、严重黄疸、溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液,然后再进行测定。
四、思考题
葡萄糖氧化酶法不能直接测定尿液葡萄糖含量;而且严重黄疸、溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液,然后再进行
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