鸡肠上皮原代细胞体外分离培养与鉴定.pdf

— 34 — 江苏农业科学 2013 年第 41 卷第 1 期 师 润，杨 霞，陈 陆，等． 鸡肠上皮原代细胞体外分离培养与鉴定［J］． 江苏农业科学，2013，41( 1) : 34 － 37． 鸡肠上皮原代细胞体外分离培养与鉴定 师 润，杨 霞，陈 陆，余秋颖，王川庆 ( 河南农业大学牧医工程学院，河南郑州 450002) 摘要: 为了探讨鸡肠上皮原代细胞分离培养方法，进一步研究人源志贺菌对鸡的致病性和为相关侵袭特性提供 体外模型，分别取不同日龄鸡胚，用 0． 1 g /mLⅠ型中性蛋白酶和 300 U /mL Ⅺ型胶原酶联合分离纯化鸡肠上皮原代细 胞，筛选其最佳培养方法，并对培养细胞进行鉴定; 然后采用 0． 125% 胰酶和 0． 01% EDTA 联合消化进行鸡肠上皮原代 细胞传代。结果显示，应用Ⅰ型中性蛋白酶和Ⅺ型胶原酶消化 15 日龄鸡胚肠组织可获得满意的肠上皮细胞分离效 果，细胞贴壁性良好。培养出圆形或多角形单层生长呈“铺路石样”的细胞，培养的细胞在 12 h 内贴壁，24 ～ 48 h 明显 增殖，72 h 后细胞增殖速度减慢，生长状况不良。经透射电镜观察鉴定为肠上皮细胞。且传代后细胞贴壁生长良好。 建立的鸡肠上皮原代细胞分离培养方法可获得纯度较高的鸡肠上皮原代细胞，制备的细胞可以连续传代 3 次。 关键词: 鸡肠上皮原代细胞; 体外培养; 鉴定; 传代 中图分类号: S831． 2 文献标志码: A 文章编号: 1002 － 1302( 2013) 01 － 0034 － 04 志贺菌( Shigella spp． ) 是肠杆菌科的革兰氏阴性兼性厌 人源志贺菌能感染鸡，且人源福氏志贺菌致病性最强。这一 氧菌，是细菌性痢疾主要病原体。10 ～ 100 个痢疾志贺菌感 发现预示着公共卫生和人类健康又面临新的挑战。为进一步 染就能使人发病，其菌毛能黏附于回肠末端和结肠黏膜上皮 揭示志贺菌引起鸡感染的相关机制，必须从细胞水平研究病 细胞表面，继而在侵袭蛋白作用下侵入肠上皮细胞中，主要在 原体与宿主的相互作用。然而体内不同类群的肠细胞之间广 黏膜固有层繁殖形成感染灶。许兰菊等 2004 年首次报道鸡 泛的相互作用使得研究极其困难，体外细胞培养为研究提供 志贺 菌 病 病 例，主 要 以 雏 鸡 脓 血 痢 为 特 征，病 死 率 可 达 了简单、快速和准确的手段［4］。由于目前鸡肠上皮传代细胞 3. 84% ～ 33． 3% ，耐过鸡生长缓慢［1］。研究发现，鸡源志贺菌 系尚未建立，因此，本研